آماده سازی رنگ آمیزی برای میکروسکوپ. تکنیک برای تهیه ریز آماده سازی. مطالعه میکروارگانیسم ها در شکل زنده

در ساخت ریز آماده‌سازی‌های موقت، دنباله عملیات زیر باید رعایت شود:

1. لام و روکش را کاملا بشویید و خشک کنید. برای اینکه کتانی بسیار شکننده نشکند، لازم است آن را در چین دستمال بین انگشت شست و سبابه دست راست قرار دهید و به آرامی با حرکت دایره ای انگشتان دستمال را پاک کنید.
2. یک قطره مایع (آب، گلیسیرین، محلول، معرف یا رنگ) را با یک پیپت روی یک لام شیشه ای بمالید.
3. اندام مورد مطالعه را با تیغه برش بزنید. تیغه باید خیلی تیز باشد.
4. نازک ترین بخش را انتخاب کنید، آن را با یک سوزن کالبد شکافی یا یک برس نازک به مرکز اسلاید شیشه ای به یک قطره مایع منتقل کنید.
5. قسمت را با لغزش پوششی ببندید تا هوا به زیر آن نرود. برای این کار ورقه روکش را با دو انگشت از لبه ها گرفته و لبه پایینی را با زاویه به لبه قطره مایع بیاورید و به آرامی پایین بیاورید.
6. اگر مایع زیادی وجود دارد و از زیر لپه بیرون می زند، آن را با کاغذ صافی بردارید. اگر قسمت‌هایی پر از هوا در زیر لغزش پوشش وجود دارد، با قرار دادن یک قطره از آن در نزدیکی لبه پوشش، مایع را اضافه کنید و کاغذ صافی را در طرف مقابل قرار دهید.

دیر یا زود، معلمان زیست شناسی و رهبران محافل وظیفه ایجاد یک ریزآماده سازی آموزشی را دارند. چه نوع ماده ای قادر است یک جسم بیولوژیکی را برای مدت طولانی ثابت کند و چگونه می توان این روش را ساده و مقرون به صرفه کرد. مومیایی کردن های شناخته شده (تثبیت کننده های رزینی) هرگز موادی به راحتی در دسترس نبوده اند، به ویژه در فاصله ای از شهرهای بزرگ. علاوه بر این، آنها می گویند که این مواد بی ضرر نیستند. و در نهایت، روند استفاده از آنها بسیار دشوار است.

برای ساخت دارو، می توانید از چسب PVA استفاده کنید. مهم است که دارو مرطوب، خوب مرطوب شده باشد و چسب تازه و کمی با آب جوشیده سرد تمیز به غلظت دلخواه رقیق شده باشد (چسب امولسیونی است و به راحتی رقیق می شود). پس از چندین بار آزمون و خطا، می توان غلظت مورد نظر را بدون مشکل جمع آوری و تعیین کرد.

سپس، یک قطره آب، جوشانده یا مقطر، روی یک لام شیشه ای تمیز ریخته می شود. آب باید با احتیاط با یک پارچه تمیز و بدون پرز یا کاغذ صافی جدا شود تا شیشه کمی مرطوب شود. این، مانند رطوبت نمونه، باعث تر شدن یکنواخت (بدون حباب) می شود. روی سطح آماده شده، باید یک قطره کوچک از چسب PVA از قبل آماده شده بمالید تا حباب های هوا ظاهر نشوند. آنها گاهی اوقات تداخل ندارند، اما ظاهر دارو خراب می شود. یک بخش یا نمونه از پیش آماده شده با دقت به این قطره منتقل می شود، به عنوان مثال، دافنی که قبلاً با آب داغ کشته شده است. سپس با یک حرکت اریب صاف، یک روکش را روی آن قرار دهید، همچنین تمیز و کمی مرطوب. لایه چسب بین شیشه ها باید تا حد امکان نازک باشد.

اگر چیزی شکست خورد و نمونه با ارزش و به اندازه کافی بزرگ بود، تقریباً همیشه برخلاف رزین ها، می توان آن را با آب معمولی شست و این روش را تکرار کرد. چسب اضافی به آرامی با یک جریان نازک آب شسته می شود. باید مطمئن شوید که بین شیشه ها جریان ندارد. شیشه پوشش باید نگه داشته شود. بقایای آب کمی کدر را می توان با احتیاط با کاغذ صافی یا پارچه ای نازک و بدون پرز پاک کرد. روش تهیه ریز بیولوژیکی

آماده سازی آماده باید در یک مکان گرم و خشک گذاشته شود. شاخص آمادگی دارو شفافیت آن است. بسته به عوامل بسیاری، خشک شدن به حالت شفاف از یک تا چهار هفته طول می کشد. این اتفاق می افتد که یک لایه خیلی ضخیم از چسب یا چسب آلوده به ناخالصی ها کاملاً شفاف نمی شود - این تا حدودی تصویر را بدتر می کند ، اما به دلیل عمق میدان کوچک میکروسکوپ ، حتی چنین آماده سازی هایی برای مطالعه در دسترس است.

هیچ تضمینی وجود ندارد که این روش برای همه آماده سازی ها اعمال شود، زیرا برخی از آنها نیاز به رنگ آمیزی دارند و رنگ ها می توانند با چسب تعامل داشته باشند.

T.N. لاشکینا، معلم زیست شناسی و اکولوژی در دبیرستان شماره 23 از شهر سیزران، روش زیر را برای تهیه ریز آماده سازی ارائه می دهد. می توانید ژلاتین معمولی بگیرید، آن را با آب بریزید تا پف کند. سپس در یک قاشق غذاخوری کمی ژلاتین متورم (بدون آب) جمع کنید و روی آتش بگذارید. وقتی ژلاتین پراکنده شد (لازم نیست بجوشد)، آن را روی یک اسلاید شیشه ای بیندازید. نمونه را داخل این قطره بریزید و با یک روکش ببندید و با انگشت خوب فشار دهید تا ژلاتین به طور یکنواخت پخش شود. میکروپرپریشن آماده است.

در صورت در دسترس نبودن روکش می توان از سلفون به جای روکش استفاده کرد. علاوه بر این، سلفون یک مزیت دارد: ریز آماده سازی نمی تواند خرد شود، زیرا. سلفون خاصیت ارتجاعی دارد و مانند روکش ترک نمی خورد.

باید سریع با ژلاتین کار کنید وگرنه یخ می زند. اما اگر این اتفاق بیفتد ، کافی است لیوان را روی آتش نگه دارید - و ژلاتین دوباره مایع می شود. ژلاتین بی ضرر، مقرون به صرفه و بسیار مقرون به صرفه است.

برای مطالعه میکروارگانیسم‌ها، میکروسکوپ میکروب‌های زنده و کشته شده به صورت رنگ‌آمیزی و رنگ‌آمیزی انجام می‌شود. یک آماده سازی میکروسکوپی روی یک اسلاید شیشه ای - یک صفحه شیشه ای نازک (76x26 میلی متر) با لبه های خوب جلا داده شده است. اسلایدهای شیشه ای مورد استفاده در تحقیقات میکروبیولوژیکی باید کریستالی شفاف و کاملاً عاری از چربی باشند. روی سطح شیشه های بدون چربی، آب به راحتی پخش می شود و قطرات کروی شکل نمی دهد.

قبل از استفاده، لیوان های جدید را در محلول سودا 1 درصد به مدت 10 دقیقه می جوشانند، با آب، اسید هیدروکلریک ضعیف شسته و به خوبی در آب مقطر شستشو می دهند. لیوان هایی که در حال استفاده بودند باید به مدت 2 ساعت با محلول اسید سولفوریک درمان شوند، به خوبی در آب شسته شوند و به مدت 10 دقیقه در محلول سودا 4٪ بجوشد. لیوان هایی که سپس با آب مقطر شسته شده اند با یک پارچه کتان تمیز پاک می شوند.

آزمایشگاه باید همیشه انباری از اسلایدهای آماده برای استفاده داشته باشد. بهتر است اسلایدهای شیشه ای را در یک شیشه با درب زمینی، غوطه ور در مخلوطی از الکل و اتر، در حجم مساوی نگهداری کنید. اسلایدهای شیشه ای با موچین از شیشه خارج می شوند. شیشه های روکش - قطعات نازک شیشه ای که به صورت مربع یا مستطیل (ضخامت 0.15-0.17 میلی متر) با ابعاد 18x18 میلی متر، 20x20 میلی متر، 18x24 میلی متر بریده شده اند.

مطالعه میکروارگانیسم ها در شکل زنده

میکروارگانیسم‌ها را می‌توان هم در حالت زنده و هم در حالت مرده (ثابت) بر روی آماده‌سازی‌های مخصوص تهیه شده با میکروسکوپ بررسی کرد. کپک ها و مخمرها را بهتر است به صورت زنده در یک آماده سازی قطره "خرد شده" مشاهده کنید. سلول‌های این میکروارگانیسم‌ها نسبتاً بزرگ هستند و معمولاً هنگام میکروسکوپی به شکل زنده، شکل، اندازه، برخی از جزئیات ساختار داخلی و همچنین ماهیت تولید مثل (جواندن، تقسیم، هاگ‌زایی و غیره) به خوبی آشکار می‌شوند. .

باکتری ها به دلیل اندازه کوچکشان اغلب بر روی آماده سازی های رنگ آمیزی ثابت مرده در نظر گرفته می شوند. در این صورت، ایده واضح تری از شکل و اندازه سلول ها، توانایی آنها در تشکیل هاگ به دست می آید. در یک شکل زنده، در یک قطره "له شده"، باکتری ها در صورتی در نظر گرفته می شوند که توانایی حرکت آنها مشخص شود.

این دارو یک قطره "له شده" است. یک قطره آب استریل روی یک لام شیشه ای بدون چربی با یک حلقه کلسینه زده می شود که مقدار کمی از کشت میکروارگانیسم مورد مطالعه (مخمر یا باکتری) که از یک محیط غذایی جامد گرفته شده است با همان حلقه وارد آن می شود. از محیط مایع، کشت را به همراه یک قطره مایع گرفته و در صورت لزوم یک قطره آب استریل به آن اضافه می کنند. کشت تعلیق میکروب ها روی شیشه باید فقط کمی کدورت ایجاد کند. هنگام میکروسکوپ مخمر، مقدار کمی متیلن بلو به صورت حلقه ای به یک قطره مایع روی شیشه اضافه می شود (تا رنگ آبی) و کل این مخلوط کاملاً هم زده می شود. رنگ آمیزی حیاتی مخمر با متیلن بلو برای آشکارسازی سلول های مرده ای که به راحتی آبی رنگ می شوند، استفاده می شود. سلول های زنده بدون رنگ باقی می مانند، زیرا اجازه نمی دهند رنگ از غشای خود عبور کند.

آماده سازی مخمر تهیه شده روی یک لام شیشه ای با یک ورقه پوششی پوشانده شده و با یک شیئ 40X بررسی می شود. در چنین آماده سازی، سلول های مخمری شفاف بیضی یا گرد با هسته و غشاء معمولاً به وضوح قابل مشاهده است که در سلول های مخمر زنده به وضوح قابل مشاهده است. سلول های مرده معمولا کوچکتر از سلول های زنده هستند و به رنگ آبی هستند.

آماده‌سازی باکتری‌های زنده مشابه آماده‌سازی مخمر تهیه می‌شود، اما باکتری‌ها را می‌توان بدون افزودن رنگ نیز مشاهده کرد. یک قطره روغن غوطه‌وری روی سطح ورقه‌ی پوششی ریخته می‌شود و لام با هدف غوطه‌وری 90 برابر، ترجیحاً در یک میدان تاریک (یعنی با عنبیه پوشیده شده) مشاهده می‌شود. اگر کشت باکتری متحرک باشد، حرکات سریع و متنوع سلول های فردی به وضوح قابل مشاهده است.

برای آماده سازی قالب، با دقت بسیار (به طوری که اندام های هاگ زایی را از بین نبرند)، یک تکه از لایه قارچ را با یک سوزن مخصوص (قابل تشریح) یا موچین گیاه شناسی برداشته و به یک قطره آبی که قبلاً روی آن ریخته شده است، منتقل می شود. اسلاید شیشه ای آماده سازی با دقت، کمی فشار داده می شود، با یک ورقه پوششی پوشانده می شود و زیر میکروسکوپ با یک شی 8X بررسی می شود. با این افزایش، ساختار اندام های هاگ زایی قارچ های کپک به خوبی مشخص می شود. برای مطالعه دقیق جزئیات فردی ساختار (هیف، کیسه و غیره)، نمونه با هدف 40X مورد بررسی قرار می گیرد. در این مورد، تنظیم نور با دیافراگم برای به دست آوردن تصویر واضح تری از جزئیات مورد نظر ضروری است.

هنگام تهیه آماده سازی در یک قطره خرد شده، باید موارد زیر را به خاطر بسپارید:

1. هنگام پایین آوردن شیشه روکش روی قطره، لبه آن را به لبه قطره لمس کنید و با کج شدن تدریجی، شیشه را پایین بیاورید.

2. قطره نباید زیاد باشد تا مایع از لبه ها سرریز نشود و در قسمت بالایی روکش نیفتد. آب اضافی را با یک تکه کاغذ صافی بردارید.

3. حباب های هوای منفرد باقی مانده در زیر پوشش معمولاً در مشاهده اختلال ایجاد نمی کنند. اما در صورت وجود حباب زیاد، دارو باید دوباره تهیه شود.

4. آماده سازی نباید خیلی غلیظ باشد تا میکروارگانیسم ها یکدیگر را مبهم نکنند.

5. آماده سازی بلافاصله در نظر گرفته می شود (به ویژه باکتری های زنده)، زیرا در غیر این صورت آب خشک می شود و سلول های باکتری تحرک خود را از دست می دهند.

6. حلقه باکتری شناسی (یا سوزن) قبل از هر عبور بعدی و بعد از آن (ریختن یک قطره آب روی لیوان، برداشتن کشت از آگار و هم زدن آن، گرفتن رنگ و ...) باید به صورت قرمز داغ در داخل آن شعله ور شود. شعله مشعل

پس از تکلیس، حلقه به سرعت در هوا خنک می شود (به مدت 2-3 ثانیه بدون دست زدن به چیزی نگه دارید) و به مرحله بعدی کار بروید.

بررسی میکروارگانیسم ها به صورت ثابت و رنگ آمیزی شده

آماده سازی اسمیر.مواد روی یک اسلاید شیشه ای تمیز و بدون چربی با یک حلقه پلاتین اعمال می شود (شکل 62). اگر مایع باشد، قطره گرفته شده توسط حلقه مستقیماً به طور یکنواخت روی سطح اسلاید شیشه ای در یک لایه نازک در سطح تقریباً 1 سانتی متر مربع توزیع می شود. اگر کشت آگار در حال مطالعه است، ابتدا یک قطره آب استریل روی لام شیشه ای ریخته می شود که در آن کشت مورد مطالعه در یک لایه نازک توزیع می شود. معلوم می شود به اصطلاح اسمیر. تمام دستکاری ها برای تهیه اسمیر باید با رعایت قوانین آسپسیس انجام شود (بر روی شعله مشعل، حلقه ها، انتهای ظروف با مواد آزمایش، شمع های پنبه ای و غیره استریل می شوند). پس از ایجاد اسمیر، در دمای اتاق خشک می شود و روی میز مخصوص خشک کردن قرار می گیرد (شکل 63). یک اسمیر خوب پس از خشک شدن باید پوششی به سختی قابل توجه ایجاد کند. دارویی با لکه غلیظ برای مشاهده کاربرد کمی دارد.

برای تسریع در خشک شدن، می توانید اسمیر را به آرامی روی شعله مشعل خشک کنید. در این حالت اسلاید شیشه ای روی شعله مشعل نگه داشته می شود تا لکه به سمت بالا باشد.

تثبیت اسمیر.یک اسلاید شیشه ای با یک اسمیر خشک شده به سمت بالا از شعله مشعل 3-4 بار در مرز بین قسمت های روشن و تاریک شعله انجام می شود. هدف از تثبیت، از بین بردن سلول های میکروبی، چسباندن آنها به شیشه و تسهیل رنگ آمیزی است. سلول های مرده رنگ را بسیار بهتر از سلول های زنده درک می کنند. در کل دارو نباید بیش از 2 ثانیه در شعله باشد. از گرم شدن بیش از حد اسمیرها باید اجتناب شود، زیرا این امر ساختار سلول ها را به شدت تغییر می دهد و اسمیر بد رنگ می شود. با تثبیت ناکافی اسمیر، می توان آن را در طول رنگ آمیزی بعدی شست. در عمل، کفایت گرمایش با زدن یک لام شیشه ای روی دست مشخص می شود. این باید مانند یک سوختگی خفیف باشد.

سکته های رنگ آمیزی.در عمل آزمایشگاهی از روش های ساده و پیچیده رنگ آمیزی میکروب ها استفاده می شود. روش های رنگ آمیزی پیچیده یا دیفرانسیل، همانطور که قبلا ذکر شد، برای مطالعه دقیق ساختار سلول ها استفاده می شود. با یک رنگ آمیزی ساده از آماده سازی، چند قطره از هر محلول رنگی (متیلن بلو، فوشسین رقیق شده و غیره) روی یک اسمیر ثابت ریخته می شود. برای به دست آوردن مواد تمیزتر، توصیه می شود محلول رنگی را روی یک تکه کاغذ صافی که روی لکه را می پوشاند بریزید. محلول رنگ به طور متوسط به مدت 2-3 دقیقه (بسته به نوع رنگ) روی اسمیر نگه داشته می شود. سرخابی به شدت رنگ می کند و همه انواع باکتری ها به یک اندازه خوب رنگ می شوند. مدت زمان رنگ آمیزی با محلول فوشسین برای 1-2 دقیقه کاملاً کافی است. متیلن بلو قلیایی به مدت 2 تا 3 دقیقه باقی می ماند تا اسمیر لکه دار شود. با شدت کمتر لکه می‌کند، اما آماده‌سازی ظریف‌تر است، علاوه بر این، باکتری‌های مختلف رنگ‌هایی با شدت متفاوت به دست می‌آورند. هنگامی که با متیلن بلو رنگ آمیزی می شود، سلول های بزرگ (به عنوان مثال، مخمر) هسته و سیتوپلاسم را متمایز می کنند. محلول بنفشه جنسی برای رنگ آمیزی به مدت 3-5 دقیقه نگه داشته می شود.

پس از مدت زمان مشخص شده، رنگ از اسلاید شیشه تخلیه می شود. اگر کاغذ صافی روی اسمیر گذاشته شده بود، باید آن را به دقت با موچین جدا کرد و سپس با جریان ملایم آب مقطر (یا آب لوله کشی) شستشو داد. جت آب باید به سمت لبه اسلاید شیشه ای باشد نه به سمت لکه. آماده سازی شسته شده در هوا در دمای اتاق یا با نوارهای کاغذ صافی خشک می شود.

یک قطره روغن سدر روی یک اسمیر خشک قرار می گیرد. روغن سدر را نباید روی اسمیر مرطوب (و حتی بیشتر از آن روی یک اسمیر مرطوب) بمالید. در این حالت امولسیون آب در روغن سرو ظاهر می شود و وضوح تصویر در میکروسکوپ به شدت کاهش می یابد.

ماهیت روش های پیچیده رنگ آمیزی در این واقعیت نهفته است که دارو نه با یک، بلکه با دو یا چند رنگ متضاد رنگ آمیزی می شود. در عمل میکروبیولوژیکی، روش پیچیده رنگ‌آمیزی گرم میکروب‌ها در تمایز میکروب‌ها از اهمیت بالایی برخوردار است.

تکنیک رنگ آمیزی میکروب ها به روش گرم به شرح زیر است. یک نوار کاغذ صافی روی یک اسمیر ثابت قرار داده می شود و محلول کربولیک بنفشه جنسی به مدت 1-2 دقیقه ریخته می شود. سپس رنگ تخلیه می شود. پس از برداشتن کاغذ و بدون شستشوی آماده سازی با آب، محلول لوگول نیز به مدت 1-2 دقیقه روی اسمیر قرار می گیرد (اسمیر سیاه می شود). پس از مدت زمان مشخص شده، محلول لوگول را از لام شیشه ای تخلیه کرده و شیشه را برای تغییر رنگ در لیوان حاوی الکل غوطه ور می کنند. اسلاید شیشه ای به مدت 30-60 ثانیه در الکل کمی تکان داده می شود. اسمیر را به سرعت با آب بشویید و به مدت 1-2 دقیقه با فوشسین رقیق شده آغشته کنید. فوشسین تخلیه می شود، آماده سازی با آب شسته می شود، خشک می شود و میکروسکوپی است.

شما می توانید رنگ آمیزی گرم میکروب ها را با استفاده از اصلاح این روش پیشنهاد شده توسط Sinev انجام دهید. به جای محلول بنفشه کربولیک، از کاغذ صافی آغشته به این محلول و خشک شده استفاده می شود. نواری از چنین کاغذی روی یک اسمیر ثابت اعمال می شود، چند قطره آب استریل روی کاغذ ریخته می شود تا کاغذ خیس شود و آماده سازی به مدت 2 دقیقه رنگ می شود. سپس کاغذ برداشته می شود، محلول لوگول روی آماده سازی ریخته می شود و سپس به همان روشی که در بالا برای رنگ آمیزی گرم نشان داده شده است ادامه دهید.

در رابطه با رنگ آمیزی گرم، تمامی باکتری ها به دو گروه گرم مثبت (گرم مثبت) و گرم منفی (گرم منفی) تقسیم می شوند. اولین در نتیجه رنگ آمیزی به رنگ بنفش باقی می ماند. دومی ها با الکل تغییر رنگ داده و با رنگ آمیزی اضافی با فوشسین قرمز می شوند. این با این واقعیت توضیح داده می شود که باکتری های گرم مثبت در سیتوپلاسم سلول ها حاوی پروتئین های خاص و نمک منیزیم اسید ریبونوکلئیک هستند که یک کمپلکس بنفش را با بنفشه و ید تشکیل می دهند که توسط الکل از بین نمی رود. در باکتری های گرم منفی، نمک منیزیم اسید ریبونوکلئیک در سلول ها وجود ندارد و در صورت رنگ آمیزی با بنفشه و ید، چنین کمپلکسی در سیتوپلاسم ایجاد نمی شود. بنفشه جنتی و ید به راحتی با الکل از بین می روند.

تهیه محلول های رنگی

در بررسی باکتریولوژیک از رنگ های پایه آنیلین برای رنگ آمیزی میکروب ها استفاده می شود. رایج ترین آنها عبارتند از: سرخابی پایه (رنگ قرمز)، آبی متیلن (رنگ آبی)، بنفش جنتی، بنفش کریستال، متیل ویولت (رنگ های بنفش). این رنگ ها به صورت پودرهای آمورف یا کریستالی به فروش می رسند که از آن محلول های رنگی تهیه می شود.

ماده اولیه برای تهیه رنگ های کاری لازم، محلول های الکل اشباع این رنگ ها است. محلول های الکلی برای آینده آماده می شوند و در بطری هایی با درپوش های زمینی ذخیره می شوند. به خودی خود، از محلول های الکلی برای رنگ آمیزی میکروب ها استفاده نمی شود.

محلول الکلی اشباع رنگ با حل کردن 1 گرم از آن در 10 میلی لیتر الکل اتیلیک 96 درصد (اتانول) به دست می آید. رنگ معمولاً به طور کامل حل نمی شود و یک رسوب کوچک در ته بطری باقی می ماند. محلول الکل حاصل به مدت 3-5 روز تزریق می شود و روزانه تکان داده می شود.

یک محلول رنگ آب الکل کار با مخلوط کردن 1 میلی لیتر از محلول الکل اشباع با 10 میلی لیتر آب مقطر به دست می آید. برای افزایش توانایی رنگ‌آمیزی، اسید کربولیک به عنوان ماده‌ای به محلول‌های آب الکلی رنگ‌ها اضافه می‌شود.

دستور العمل برای تهیه رنگ های رایج.

فوشین کربولیک تسیلیا. 10 میلی لیتر از محلول الکلی اشباع شده فوشسین بازی با 100 میلی لیتر اسید کربولیک 5٪ مخلوط می شود. می توانید یک محلول رنگ آمیزی مستقیماً از رنگ خشک تهیه کنید. برای انجام این کار، 1 گرم فوشسین بازی را در هاون با 5 گرم کربولیک اسید کریستالی آسیاب می کنند. برای مالش بهتر توصیه می شود چند قطره گلیسیرین اضافه کنید. سپس به تدریج 10 میلی لیتر الکل 96 درصد بریزید. 100 میلی لیتر آب مقطر به تدریج به توده یکنواخت آسیاب شده اضافه می شود، مخلوط می شود و 1-2 روز باقی می ماند. سپس از طریق فیلتر کاغذی فیلتر می شود. Fuchsin Tsilya مقاوم است و می تواند برای مدت طولانی نگهداری شود. برای رنگ آمیزی اسپورها و باکتری های مقاوم به اسید که درک رنگ آنها دشوار است استفاده می شود.

فوشین فایفر(فوشین رقیق شده). 1 میلی لیتر فوشین کربولیک زیل با 9 میلی لیتر آب مقطر مخلوط می شود. محلول ناپایدار است، بنابراین بلافاصله قبل از رنگ آمیزی آماده می شود. برای رنگ آمیزی ساده اسمیرها و رنگ آمیزی اضافی آنها به روش گرم استفاده می شود.

بنفشه کربولیک جنتی. 10 میلی لیتر از محلول الکل اشباع شده بنفشه جنتین با 100 میلی لیتر اسید کربولیک 5 درصد مخلوط می شود یا 1 گرم بنفشه جنتین در هاون با 5 گرم کربولیک اسید کریستالی، 10 میلی لیتر الکل 96 درصد و 100 میلی لیتر مقطر آسیاب می شود. آب به تدریج اضافه می شود.

متیلن آبی قلیایی(طبق گفته Lefleur). به 100 میلی لیتر آب مقطر 30 میلی لیتر محلول الکل اشباع رنگ و 1 میلی لیتر محلول 1 درصد پتاس سوز آور (KOH) اضافه کنید. محلول فیلتر می شود. رنگ بسیار بادوام است و قدرت رنگ دهی رنگ قدیمی بیشتر از رنگ تازه تهیه شده است.

محلول آبی متیلن بلو. 1 گرم متیلن بلو در 100 میلی لیتر آب مقطر حل می شود.

محلول لوگول 2 گرم یدید پتاسیم در 5 میلی لیتر آب مقطر حل می شود و 1 گرم ید کریستالی به آن اضافه می شود. حجم با آب تا 300 میلی لیتر تنظیم می شود. محلول لوگول باید واکنش کمی قلیایی یا خنثی داشته باشد. در یک واکنش اسیدی، با بی کربنات سودا خنثی می شود (توسط تورنسل). محلول باید در بطری های شیشه ای تیره و دور از نور نگهداری شود.

تهیه کاغذ صافی آغشته به بنفشه جنتینی برای رنگ‌آمیزی گرم میکروب‌ها در اصلاح سینو. محلول بنفشه کربولیک جنتین به مدت یک روز در یک ترموستات در دمای 37 درجه سانتیگراد قرار داده می شود و سپس از طریق فیلتر کاغذی فیلتر می شود. فیلتر را در یک بشقاب ریخته و کاغذ صافی که به صورت نوار بریده شده است به مدت 1-2 دقیقه در آن غوطه ور می شود. کاغذ آغشته به رنگ خشک می شود، به قطعات (2x4 سانتی متر) بریده می شود و در بطری های تیره با درپوش های زمینی نگهداری می شود. ماندگاری نامحدود است.

توجه داشته باشید.محلول های رنگ کربولیک تازه تهیه شده دارای یک لایه با براق فلزی روی سطح هستند. این راه حل ها پایدار هستند و برای مدت طولانی باقی می مانند. با این حال، اگر برای مدت طولانی ذخیره شوند، ممکن است غیر قابل استفاده شوند. در این حالت، درخشش فلزی روی سطح آنها ناپدید می شود و یک رسوب پودری ریز در پایین تشکیل می شود.

1) آماده سازی موقت

برای مطالعه اجسام گیاهی با استفاده از میکروسکوپ نوری، تهیه یک میکروپرپراسیون ضروری است. ریز آماده سازی هایی که برای نگهداری طولانی مدت در نظر گرفته نشده اند، موقت نامیده می شوند. جسم مورد مطالعه روی یک لام شیشه ای در یک قطره آب، گلیسیرین، محلول، معرف یا رنگ قرار داده می شود و با یک لام پوششی پوشانده می شود. چنین آماده سازی را می توان برای چند روز با قرار دادن آنها در یک فضای مرطوب نگهداری کرد.

2) آماده سازی دائمی

آماده سازی های دائمی طبق روش های خاصی تهیه می شوند که نگهداری آنها را برای چندین دهه تضمین می کند. آماده سازی های دائمی شامل اسمیر، آماده سازی کل و برش ها می باشد. اسمیر در مطالعه سلول های خونی، کشت میکروارگانیسم ها، سلول های بافت جدا شده استفاده می شود. آماده سازی توتال اجسام شفاف و نازک مجزا هستند بخش های آموزشی را می توان به صورت دستی با استفاده از تیغ درست کرد. با این حال، مقاطع با کیفیت بالا با ضخامت معین 10 ... 22 میکرومتر معمولاً با استفاده از دستگاه های ویژه - میکروتوم ها ساخته می شوند. این بخش ها اغلب به عنوان آماده سازی میکروتوم شناخته می شوند. برای به دست آوردن مقاطع نازک تر (0.01 ... 0.05 میکرون یا 10 ... 50 نانومتر) از اولترامیکروتوم ها استفاده می شود.

اجازه دهید به طور خلاصه مراحل اصلی در تهیه آماده سازی دائمی را در نظر بگیریم.

1. تثبیت مواد. بلافاصله پس از پایان فیکساسیون، مواد با آب (بعد از فیکساتورهای آب) یا 80% الکل (بعد از فیکساتورهای الکلی). تعداد تغییرات مایعات شستشو - حداقل 3. زمان - تا 24 ساعت.

2. کم آبی در الکل های با غلظت فزاینده. به طور موازی، مواد فشرده می شود. حرکت متوالی مواد از طریق یک سری محلول را سیم کشی می گویند. پس از فیکساتورهای آب، 8 تغییر الکل استفاده می شود: 20٪، 40٪، 80٪، دو تغییر 96٪، دو تغییر 100٪. پس از فیکساتورهای الکل - 4 تغییر الکل: دو تغییر 96٪ و دو تغییر 100٪. در هر شیفت مواد به مدت 1 ساعت کهنه می شود.

3. روشنگری. این اشباع مواد با یک حلال پارافین - زایلن (بنزن، کلروفرم) است. نمونه به مدت 1 ساعت به صورت متوالی در هر یک از محلول های زیر قرار می گیرد: 3 قسمت الکل + 1 قسمت زایلن، سپس 2 قسمت الکل + 2 قسمت زایلن، سپس 1 قسمت الکل + 3 قسمت زایلن، سپس دو تغییر زایلن.

4. تعبیه شده در پارافین. این جایگزینی زایلن با پارافین است. نمونه را در مخلوطی از زایلن و پارافین در دمای 55 ... 57 درجه قرار داده و در ترموستات در این دما قرار می دهند تا زمانی که زایلن کاملاً تبخیر شود (از چند ساعت تا چند روز). سپس در دمای 55 ... 57 درجه، سیم کشی از طریق پارافین I (6 ... 12 ساعت)، پارافین II (6 ... 12 ساعت) و ریختن در پارافین III انجام می شود. پارافین های I، II، III فقط از نظر خلوص متفاوت هستند: پارافین III محیط نهایی است که باید بالاترین خلوص را داشته باشد. در نتیجه بلوک های پارافینی به دست می آیند که نمونه های مواد در آن محصور می شوند. این بلوک ها را می توان در هر جهتی برش داد.

5. رنگ آمیزی برش ها. بخش های پارافین به یک اسلاید شیشه ای تمیز چسبانده می شوند. به عنوان یک چسب، می توانید از مخلوطی از پروتئین تخم مرغ با گلیسیرین (به نسبت 1: 2) با افزودن یک ضد عفونی کننده (تیمول یا فنل) استفاده کنید. بخش ها معمولاً پارافین زدایی می شوند. برای انجام این کار، شیشه با بخش های چسبانده شده از طریق زایلن، الکل های با غلظت کاهشی (100٪، 96٪، 80٪، 70٪) و آب مقطر عبور داده می شود. زمان اقامت در هر محیط 2...3 دقیقه است. سپس طبق روش ها رنگ آمیزی می شود.

6. کم آبی و پاکسازی بخش های لکه دار. با سیم کشی از طریق الکل های با غلظت فزاینده و سپس از طریق زایلن انجام می شود.

7. نتیجه گیری در محیط (پر). برای نگهداری طولانی مدت داروها باید در محیطی محصور شوند که دارو را از اکسیداسیون هوا و حمله قارچی محافظت کند. برای پر کردن، از رزین های مخصوص (بالسان کانادایی، بلسان صنوبر) استفاده می شود که در زایلن به غلظت عسل مایع حل می شود. یک قطره از این محلول روی قسمت ریخته می شود و با یک روکش پوشانده می شود.

6. ترکیب شیمیایی ماده سلولی. عناصر میکرو و کلان

بیش از 80 عنصر شیمیایی در ترکیب سلول یافت شد، در حالی که هیچ عنصر خاصی که فقط مشخصه موجودات زنده باشد یافت نشد. با این حال، تنها 27 عنصر می دانند که چه عملکردهایی را انجام می دهند. 53 عنصر باقی مانده احتمالاً از محیط خارجی وارد بدن می شوند.

1. درشت مغذی ها

آنها بخش عمده ای از ماده سلول را تشکیل می دهند. آنها حدود 99 درصد از جرم کل سلول را تشکیل می دهند. غلظت چهار عنصر به ویژه زیاد است: اکسیژن (65-75٪)، کربن (15-18٪)، نیتروژن (1.5-3٪) و هیدروژن (8-10٪). عناصر کلان نیز شامل عناصری هستند که محتوای آنها در یک سلول بر حسب دهم و صدم درصد محاسبه می شود. اینها، به عنوان مثال، پتاسیم، منیزیم، فسفر، گوگرد، آهن، کلر، سدیم هستند.

2. عناصر کمیاب این عناصر عمدتاً شامل اتم های فلزی هستند که بخشی از آنزیم ها، هورمون ها و

سایر مواد حیاتی در بدن، این عناصر در مقادیر بسیار کمی وجود دارند: از 0.001 تا 0.000001٪. از جمله این عناصر می توان به بور، کبالت، مس، مولیبدن، روی، ید، برم و غیره اشاره کرد.

3. اولترامیکرو عناصر

غلظت آنها از 0.000001٪ تجاوز نمی کند. این عناصر شامل اورانیوم، رادیوم، طلا، جیوه، بریلیم، سزیم و سایر عناصر کمیاب است. نقش فیزیولوژیکی بیشتر این عناصر در موجودات گیاهان، حیوانات، قارچ ها و باکتری ها هنوز مشخص نشده است.

آزمایشگاه شماره 1

موضوع: "تهیه و شناسایی ریز آماده سازی سلول های موجودات مختلف".

هدف، واقعگرایانه:برای تثبیت توانایی تهیه ریزآماده‌ها و بررسی آنها در زیر میکروسکوپ، یافتن ویژگی‌های ساختاری سلول‌های موجودات مختلف، دانستن اصطلاحات موضوع.

تجهیزات:پوست فلس‌های پیاز، سلول‌های اپیتلیال حفره دهان انسان، کشت باسیل یونجه، یک لیوان آب، یک میکروسکوپ، یک قاشق چای‌خوری، شیشه‌های پوششی و اسلاید، جوهر آبی، ید، ریز آماده‌سازی سلول‌های جانوری چند سلولی، دفترچه یادداشت، قلم مداد ساده، خط کش،

روند کار:

کار 1.

1. توالی آماده سازی تهیه پوست پیاز را در شکل در نظر بگیرید.
2. اسلاید شیشه را با پاک کردن کامل آن با گاز آماده کنید.
3. 1-2 قطره آب را روی یک لام شیشه ای پیپت کنید.
4. با استفاده از یک سوزن کالبد شکافی، تکه کوچکی از پوست شفاف را از سطح داخلی فلس های پیاز به دقت جدا کنید. یک تکه پوست را در یک قطره آب قرار دهید و با نوک سوزن صاف کنید.
5. مطابق شکل، پوست را با یک روکش بپوشانید.
6. آماده سازی آماده شده را با بزرگنمایی کم مشاهده کنید. توجه داشته باشید که کدام بخش از سلول را می بینید.
7. اسلاید را با محلول ید آغشته کنید. برای انجام این کار، یک قطره محلول ید را روی یک لام شیشه ای بریزید. با کاغذ صافی از طرف دیگر، محلول اضافی را بردارید.
8. آماده سازی رنگ آمیزی شده را بررسی کنید. چه تغییراتی رخ داده است?

9. آماده سازی را با بزرگنمایی بالا مشاهده کنید. روی آن کلروپلاست ها را در سلول های برگ پیدا کنید، نوار تیره ای که سلول، پوسته را احاطه کرده است. زیر آن یک ماده طلایی است - سیتوپلاسم (می تواند کل سلول را اشغال کند یا نزدیک دیوارها باشد). هسته به وضوح در سیتوپلاسم قابل مشاهده است. یک واکوئل با شیره سلولی پیدا کنید (رنگ آن با سیتوپلاسم متفاوت است).

10. 2-3 سلول پوست پیاز را بکشید. غشاء، سیتوپلاسم، هسته، واکوئل را با شیره سلولی مشخص کنید.
در سیتوپلاسم یک سلول گیاهی اجسام کوچک متعددی وجود دارد - پلاستیدها. در بزرگنمایی بالا، آنها به وضوح قابل مشاهده هستند. در سلول های اندام های مختلف تعداد پلاستیدها متفاوت است.
در گیاهان، پلاستیدها می توانند رنگ های مختلفی داشته باشند: سبز، زرد یا نارنجی و بی رنگ. به عنوان مثال، در سلول های پوست فلس های پیاز، پلاستیدها بی رنگ هستند.

کار 2.

1. یک میکروپرپرتیشن از باکتری یونجه تهیه کنید.

2. آماده سازی را زیر میکروسکوپ بررسی کنید.

3. ریز آماده سازی سلول های موجودات جانوری چند سلولی را در نظر بگیرید.

4. آنچه را که می بینید با تصویر جسم در شکل مقایسه کنید.

شغل 3

ریز آماده سازی سلول های حیوانات چند سلولی را در نظر بگیرید
آنچه را که می بینید با تصویر جسم در تصویر مقایسه کنید.

3. اندامک های سلولی نشان داده شده در شکل. 4

آزمایشگاه شماره 2

موضوع: "مشاهده پدیده پلاسمولیز و دپلاسمولیز"

هدف:بررسی وجود پدیده پلاسمولیز و دپلاسمولیز در سلول های گیاهی زنده و سرعت عبور فرآیندهای فیزیولوژیکی.

تجهیزات:میکروسکوپ، اسلاید و روکش، میله های شیشه ای، لیوان های آب، کاغذ صافی، محلول نمکی، پیاز.

روند کار

پوست پایین فلس های پیاز (4 میلی متر 2) را بردارید.
یک ریزآماده آماده کنید، 4-5 سلول از آنچه می بینید را بررسی و ترسیم کنید.
در یک طرف پوشش، چند قطره محلول کلرید سدیم بمالید و در طرف دیگر، آب را با یک نوار کاغذ صافی بردارید.
ریزآماده سازی را برای چند ثانیه بررسی کنید. به تغییراتی که در غشای سلولی رخ داده است و مدت زمانی که این تغییرات رخ داده است توجه کنید. شیء تغییر یافته را ترسیم کنید.
چند قطره آب مقطر را به لبه روکش بریزید و آن را با کاغذ صافی از طرف دیگر بکشید و محلول پلاسمالیزه کننده را بشویید.
ریز آماده سازی را برای چند دقیقه زیر میکروسکوپ بررسی کنید. به تغییرات در موقعیت غشای سلولی و زمانی که این تغییرات رخ داده است توجه کنید.
آنچه را که می بینید با تصویر شی در شکل 1 مقایسه کنید.
شی مورد مطالعه را ترسیم کنید.
با توجه به میزان پلاسمولیز و دپلاسمولیز مطابق با هدف کار نتیجه گیری کنید. تفاوت سرعت این دو فرآیند را توضیح دهید.

به سوالات پاسخ دهید:

1. هنگامی که بافت در محلول نمک قرار گرفت، آب به کجا (به داخل یا خارج از سلول) حرکت کرد؟

2. چگونه می توان این جهت حرکت آب را توضیح داد؟

3. با قرار دادن پارچه در آب، آب کجا حرکت کرد؟ چه چیزی این را توضیح می دهد؟

4. به نظر شما اگر سلول ها برای مدت طولانی در محلول نمک قرار گیرند چه اتفاقی می افتد؟

5. آیا می توان از محلول نمک برای از بین بردن علف های هرز استفاده کرد؟

6. اصطلاحات - پلاسمولیز، دپلاسمولیز، اسمز، تورگ را تعریف کنید.
7. توضیح دهید چرا آب سیب در مربا کم می شود؟

شکل 1. پلاسمولیز و دپلاسمولیز

آزمایشگاه شماره 3

موضوع: "مقایسه ساختار سلول های گیاهی و جانوری، قارچ ها، باکتری ها."

هدف:یاد بگیرید که ویژگی های ساختاری سلول های موجودات مختلف را پیدا کنید، آنها را با یکدیگر مقایسه کنید. تسلط بر اصطلاحات موضوع

تجهیزات:میکروسکوپ، اسلاید و روکش شیشه ای، لیوان های حاوی آب، میله های شیشه ای، برگ های elodea، مخمر، کشت باسیل یونجه، ریزآماده سازی سلول های حیوانات چند سلولی.

کار 1.

1. آماده سازی سلول های برگ elodea. برای انجام این کار، برگ را از ساقه جدا کنید، آن را در یک قطره آب بر روی یک لام شیشه ای قرار دهید و با یک روکش بپوشانید.
2. آماده سازی را زیر میکروسکوپ بررسی کنید. یافتن کلروپلاست در سلول ها
3. ساختار سلول برگ Elodea را ترسیم کنید. برای نقاشی خود شرح بنویسید. 4. شکل 1 را در نظر بگیرید. در مورد شکل، اندازه سلول ها نتیجه گیری کنید اندام های مختلف گیاهی

برنج. 1. رنگ، شکل و اندازه سلول های اندام های مختلف گیاهی

کار 2.

1. با قاشق چای خوری کمی خلط از داخل گونه بردارید. 2. اسلایم را روی یک اسلاید شیشه ای قرار دهید و با جوهر آبی رقیق شده در آب رنگ کنید. نمونه را با یک نوار پوششی بپوشانید. 3. آماده سازی را زیر میکروسکوپ بررسی کنید.

شغل 3

یک ریزآماده سازی آماده از سلول های موجودات جانوری چند سلولی را در نظر بگیرید.

2. آنچه را که در درس دیدید با تصویر اشیاء روی جداول مقایسه کنید.

این سلول ها را با یکدیگر مقایسه کنید.
نتایج مقایسه را در جدول 1 ثبت کنید

به سوالات پاسخ دهید:

شباهت ها و تفاوت های بین سلول ها چیست؟
دلایل شباهت و تفاوت بین سلول های موجودات مختلف چیست؟

کار عملی

موضوع : "تدوین ساده ترین طرح های عبور."

هدف:یاد بگیرید که انواع گامت های تشکیل شده توسط ارگانیسم هایی با ژنوتیپ های مشخص را بنویسید. به طور خلاصه شرایط وظایف ژنتیکی را بنویسید. حل مشکلات موقعیتی در ژنتیک؛ از مهارت های اصطلاحات ژنتیکی استفاده کنید.

تجهیزات:کتاب درسی، دفترچه، شرایط تکلیف، خودکار.

روند کار:

تمرین 1

انواع گامت های تشکیل شده توسط ارگانیسم هایی با ژنوتیپ های زیر را بنویسید: AAbb، Aa، MmPP، PPKk، AabbCc، AabbCcPP، AaBbCc.

هنگام نوشتن گامت ها، باید به خاطر داشت که در یک ارگانیسم هموزیگوت برای یک (AA) یا چند ژن (AAbbcc)، همه گامت ها برای این ژن ها یکسان هستند، زیرا آنها حامل یک آلل هستند.

در مورد هتروزیگوسیتی برای یک ژن (Aa)، ارگانیسم دو نوع گامت حامل آلل های مختلف خود را تشکیل می دهد. ارگانیسم دی هتروزیگوت (AaBb) چهار نوع گامت تولید می کند. به طور کلی، ارگانیسم هر چه تعداد گامت های بیشتری را تشکیل دهد، ژن های بیشتری برای هتروزیگوت دارد. تعداد کل انواع گامت ها 2 به توان n است که n تعداد ژن ها در حالت هتروزیگوت است. هنگام نوشتن گامت ها، لازم است قانون "خالص" گامت ها را هدایت کنید، که طبق آن هر گامت حامل یکی از هر جفت ژن آللی است.

وظیفه 2

یاد بگیرید که به طور خلاصه شرایط یک مشکل موقعیتی ژنتیکی و راه حل آن را بنویسید.

هنگام نوشتن مختصر شرایط کار ژنتیکی، صفت غالب با حروف بزرگ (A) و یک مغلوب با حروف کوچک (a) با تعیین نوع مربوط به صفت مشخص می شود. ژنوتیپ ارگانیسمی که دارای یک صفت غالب است، بدون نشانه های اضافی از همنوع یا هتروزیگوسیته آن در شرایط مشکل، A نشان داده می شود، که در آن سوال نشان دهنده نیاز به تعیین ژنوتیپ در مسیر حل مشکل است. ژنوتیپ یک ارگانیسم با صفات مغلوب همیشه برای آلل مغلوب - aa هموزیگوت است. صفات مرتبط با جنسی در مورد وراثت وابسته به X به عنوان Xª یا XA تعیین می شوند.

نمونه ای از ثبت مختصر شرایط و حل مسئله

یک وظیفه. در انسان، نوع رنگ چشم قهوه ای بر نوع چشم آبی غالب است. یک زن چشم آبی با یک مرد هتروزیگوت با چشم قهوه ای ازدواج می کند. کودکان چه رنگ چشمی می توانند داشته باشند؟

ثبت شرایط مختصر رکورد تصمیم گیری مختصر

الف - چشمان قهوه ای والدین - R aa x Aa

الف - رنگ آبی چشم گامت - G a A, a

والدین: aa x Aa فرزندان - F Aa aa

فرزندان؟ رنگ قهوه ای رنگ آبی

وظیفه 3

شرایط مشکل موقعیت ژنتیکی و راه حل آن را به طور خلاصه بنویسید.

وظیفه: در انسان، نزدیک بینی بر دید طبیعی غالب است. والدین نزدیک بینی کودکی با دید طبیعی به دنیا آوردند. ژنوتیپ والدین چیست؟ چه فرزندان دیگری از این ازدواج می تواند باشد؟

کار عملی

موضوع : «حل مشکلات ژنتیکی».

هدف:یاد بگیرید چگونه مشکلات ژنتیکی را حل کنید. توضیح تأثیر عوامل خارجی بر تجلی یک صفت؛ از مهارت های اصطلاحات ژنتیکی استفاده کنید.

تجهیزات: کتاب درسی، دفترچه یادداشت، شرایط کار، خودکار.

روند کار:

1. قوانین اساسی وراثت صفات را به یاد آورید.

2. تجزیه و تحلیل جمعی از مشکلات برای تلاقی تک هیبریدی و دی هیبریدی.

3. حل مستقل مسائل برای تقاطع تک هیبریدی و دی هیبریدی، شرح مفصل سیر حل و فرمول بندی پاسخ کامل.

4. بحث جمعی حل مسئله بین دانش آموزان و معلم.

5. نتیجه گیری کنید.

وظایف تقاطع تک هیبریدی

وظیفه شماره 1. در گاو، ژنی که رنگ سیاه پوست را تعیین می کند بر ژنی که رنگ قرمز را تعیین می کند غالب است. از تلاقی یک گاو نر سیاه هموزیگوت و یک گاو قرمز چه فرزندانی می توان انتظار داشت؟

بیایید راه حل این مشکل را تجزیه و تحلیل کنیم. اجازه دهید ابتدا نماد را معرفی کنیم. در ژنتیک، نمادهای الفبایی برای ژن ها پذیرفته می شود: ژن های غالب با حروف بزرگ، ژن های مغلوب با حروف کوچک نشان داده می شوند. ژن رنگ سیاه غالب است، بنابراین ما آن را A نشان می دهیم. ژن قرمز رنگ پشم مغلوب است - a. بنابراین، ژنوتیپ یک گاو نر سیاه هموزیگوت AA خواهد بود. ژنوتیپ گاو قرمز چیست؟ دارای یک صفت مغلوب است که می تواند خود را از نظر فنوتیپی فقط در حالت هموزیگوت (ارگانیسم) نشان دهد. بنابراین، ژنوتیپ او aa است. اگر حداقل یک ژن غالب A در ژنوتیپ گاو وجود داشت، رنگ پوشش او قرمز نبود. اکنون که ژنوتیپ افراد والدین مشخص شده است، لازم است یک طرح تلاقی نظری تهیه شود.

یک گاو نر سیاه با توجه به ژن مورد مطالعه یک نوع گامت را تشکیل می دهد - همه سلول های زایا فقط حاوی ژن A هستند. برای راحتی محاسبه، ما فقط انواع گامت ها را می نویسیم و نه همه سلول های زایای یک حیوان را. یک گاو هموزیگوت نیز یک نوع گامت دارد - a. هنگامی که چنین گامت ها با یکدیگر ادغام می شوند، یکی، تنها ژنوتیپ ممکن تشکیل می شود - Aa، یعنی. همه فرزندان یکنواخت خواهند بود و دارای ویژگی والدین با فنوتیپ غالب - گاو نر سیاه هستند.

بنابراین، می‌توانیم پاسخ زیر را بنویسیم: هنگام عبور از یک گاو نر سیاه هموزیگوت و یک گاو قرمز، فقط گوساله‌های هتروزیگوت سیاه را باید در فرزندان انتظار داشت.

وظایف زیر باید به طور مستقل حل شوند و روند حل را با جزئیات شرح دهند و یک پاسخ کامل را فرموله کنند.

کار شماره 2. چه فرزندانی را می توان از عبور از گاو و گاو نر انتظار داشت که از نظر رنگ پوشش هتروزیگوت است؟

وظیفه شماره 3. در خوکچه هندی، موی پر شده توسط ژن غالب و موهای صاف توسط ژن مغلوب تعیین می شود.

1. تلاقی دو خوک چرخان با یکدیگر 39 فرد با موهای چرخان و 11 حیوان مو صاف را به همراه داشت. چه تعداد از افراد با فنوتیپ غالب باید برای این صفت هموزیگوت باشند؟

2. خوکچه هندی با موهای موج دار، هنگامی که با فردی با موهای صاف تلاقی کرد، 28 نسل پرزدار و 26 نسل مو صاف در فرزندان ایجاد کرد. ژنوتیپ والدین و فرزندان را تعیین کنید.

وظایف تقاطع دی و پلی هیبریدی

کار شماره 7. گامت های موجودات با ژنوتیپ های زیر را بنویسید: AABB; aabb; AAL; aaBB; AaBB abb عاب AABBSS; AALCC; Aabcc; Aabcc.

بیایید به یکی از نمونه ها نگاه کنیم. هنگام حل چنین مشکلاتی، باید با قانون خلوص گامت هدایت شود: یک گامت از نظر ژنتیکی خالص است، زیرا تنها یک ژن از هر جفت آللی وارد آن می شود. به عنوان مثال، فردی با ژنوتیپ AaBbCc را در نظر بگیرید. از اولین جفت ژن - جفت A - در طول میوز یا ژن A یا ژن a وارد هر سلول زایایی می شود. در همان گامت، از یک جفت ژن B که روی کروموزوم دیگر قرار دارد، ژن B یا b وارد می شود. جفت سوم همچنین ژن غالب C یا آلل مغلوب آن، c را برای هر سلول جنسی تامین می کند. بنابراین، یک گامت می‌تواند شامل همه ژن‌های غالب - ABC، یا ژن‌های مغلوب - abc و همچنین ترکیبات آنها باشد: ABc، AbC، Abe، aBC، aBc، و bC.

برای اینکه در تعداد واریته های گامت تشکیل شده توسط ارگانیسم با ژنوتیپ مورد مطالعه اشتباه نشود، می توانید از فرمول N = 2n استفاده کنید که N تعداد انواع گامت و n تعداد جفت های ژن هتروزیگوت است. به راحتی می توان صحت این فرمول را با مثال هایی تأیید کرد: هتروزیگوت Aa دارای یک جفت هتروزیگوت است. بنابراین، N = 21 = 2. دو نوع گامت را تشکیل می دهد: A و a. دی هتروزیگوت AaBb شامل دو جفت هتروزیگوت است: N = 22 = 4، چهار نوع گامت تشکیل می شود: AB، Ab، aB، ab. تری هتروزیگوت AaBbCc، مطابق با این، باید 8 نوع سلول زاینده N = 23 = 8 را تشکیل دهد، آنها قبلاً در بالا نوشته شده اند.

وظیفه شماره 8. در گاو، ژن نظرسنجی بر ژن شاخدار و ژن پوشش سیاه بر ژن رنگ قرمز غالب است. هر دو جفت ژن روی جفت کروموزوم های مختلف قرار دارند.

1. اگر برای هر دو جفت از هتروزیگوت عبور کنید، گوساله ها چه خواهند شد

نشانه های گاو نر و گاو؟

2. از تلاقی یک گاو نر سیاه، هتروزیگوت برای هر دو جفت صفت، با گاو شاخدار قرمز چه فرزندانی باید انتظار داشت؟

وظایف اضافی برای کارهای آزمایشگاهی

وظیفه شماره 1. یک فرزند از 225 راسو در مزرعه خز به دست آمد. از این تعداد، 167 حیوان دارای خز قهوه ای و 58 راسو به رنگ خاکستری مایل به آبی هستند. ژنوتیپ های اشکال اصلی را تعیین کنید، اگر مشخص باشد که ژن رنگ قهوه ای بر ژنی که رنگ پوشش خاکستری مایل به آبی را تعیین می کند، غالب است.

وظیفه شماره 2. در انسان، ژن چشم قهوه ای بر ژنی که باعث آبی شدن چشم می شود غالب است. مردی چشم آبی که یکی از والدینش چشمان قهوه ای داشت با زنی چشم قهوه ای ازدواج کرد که پدرش چشمان قهوه ای و مادرش آبی بود. از این ازدواج چه فرزندی می توان انتظار داشت؟

کار شماره 3. آلبینیسم به عنوان یک صفت مغلوب در انسان به ارث می رسد. در خانواده ای که یکی از همسران زال است و دیگری موی رنگدانه دارد، دو فرزند وجود دارد. یک کودک آلبینو است و دیگری موهای رنگ شده دارد. احتمال داشتن فرزند آلبینو بعدی چقدر است؟

تکلیف شماره 4. در سگ ها، رنگ مشکی کت بر قهوه و کت کوتاه بر کت بلند غالب است. هر دو جفت ژن روی کروموزوم های مختلف قرار دارند.

1. چند درصد از توله سگ های مو کوتاه سیاه را می توان انتظار داشت که از دو فردی که برای هر دو صفت هتروزیگوت هستند عبور کنند؟

2. شکارچی یک سگ سیاه مو کوتاه خریده است و می خواهد مطمئن شود که ژن سگ های مو بلند قهوه ای رنگ را ندارد. برای بررسی ژنوتیپ سگ خریداری شده کدام فنوتیپ و شریک ژنوتیپ باید برای تلاقی انتخاب شود؟

وظیفه شماره 5. در انسان، ژن چشم قهوه ای بر ژنی که رشد چشم آبی را تعیین می کند، غالب است و ژنی که توانایی کنترل بهتر دست راست را تعیین می کند، بر ژنی که رشد چپ دستی را تعیین می کند، غلبه دارد. هر دو جفت ژن بر روی کروموزوم های مختلف قرار دارند. اگر والدینشان هتروزیگوت باشند، بچه ها چگونه می توانند باشند؟

کار شماره 6. در انسان، ژن مغلوب a تعیین کننده ناشنوایی مادرزادی است. یک مرد کر و لال ارثی با زنی با شنوایی طبیعی ازدواج کرد. آیا می توان ژنوتیپ مادر کودک را تعیین کرد؟

کار شماره 7. از دانه نخود زرد گیاهی به دست آمد که 215 دانه تولید کرد که 165 دانه آن زرد و 50 دانه سبز بود. ژنوتیپ های همه اشکال چیست؟

کار شماره 8. پدر و مادر طعم تلخ فنیل تی اوره را می چشند. از هر چهار کودک دو نفر این دارو را نمی چشند. با فرض اینکه تفاوت در حساسیت به فنیل تی اوره تک ژنی است، عدم حساسیت غالب یا مغلوب به فنیل تی اوره را تعیین کنید.

لکه گرم.

مرحله ی 1- تهیه اسمیر

اسلاید شیشه ای در شعله یک مشعل گازی شلیک می شود. با یک مداد مومی، حدود اسمیر آینده را به شکل دایره ای به قطر 1-2 سانتی متر مشخص کنید و لیوان را روی میز قرار دهید. با یک حلقه کلسینه شده، یک قطره کوچک از محلول کلرید سدیم ایزوتونیک استریل (ICN) به وسط دایره اعمال می شود. سپس مقدار کمی از کشت باکتریایی به این قطره اضافه شده، به دقت امولسیون شده و در یک لایه نازک در داخل دایره توزیع می شود. اسمیر از کشت های براث بدون استفاده قبلی از ICN تهیه می شود.

2 صحنه- خشك كردن.

لیوان در هوا می ماند تا رطوبت از بین برود.

3 صحنه- تثبیت

تثبیت به منظور از بین بردن میکروب ها، اتصال آنها به شیشه و افزایش حساسیت آنها به رنگ انجام می شود. برای تثبیت، یک لام شیشه ای (استروک به بالا) سه بار به مدت 2-3 ثانیه با فاصله 4-6 ثانیه روی شعله مشعل اعمال می شود. لکه های چرک، خون، خلط، مایع ادماتوز با غوطه ور شدن در مایعات ثابت کننده (استون، مخلوط نیکیفوروف) ثابت می شوند. این تثبیت از تغییر شکل فاحش موضوع مطالعه جلوگیری می کند.

مرحله 4 - رنگ آمیزی.

روش های ساده و پیچیده (متمایز کننده) رنگ آمیزی وجود دارد. روش های ساده قضاوت در مورد اندازه، شکل، محلی سازی و موقعیت نسبی سلول ها را ممکن می سازد. روش های پیچیده ایجاد ساختار میکروب ها و اغلب رابطه نابرابر آنها با رنگ ها را ممکن می سازد. نمونه ای از روش های ساده رنگ آمیزی با فوشسین (1-2 دقیقه)، متیلن آبی یا بنفش کریستال (3-5 دقیقه) و روش های پیچیده - رنگ آمیزی با توجه به Gram، Romanovsky-Giemsa، Ziehl-Nielsen است.

روش تمایز گرام

پس از رنگ آمیزی با این روش، تعدادی از باکتری ها به رنگ بنفش تیره (گرم مثبت، Gr +) رنگ آمیزی می شوند. دیگران - به رنگ قرمز شرابی (گرم منفی، Gr-). ماهیت این روش رنگ‌آمیزی این است که باکتری‌های Gr+ کمپلکس بنفشه و ید را بدون رنگ‌زدایی با اتانول محکم می‌کنند. باکتری های Gr پس از سفید کردن با فوشسین رنگ آمیزی می شوند.

مراحل رنگ آمیزی گرم