تکنیک نقشه های کروماتوگرافی کاغذی. GPM.1.2.0002.15 کروماتوگرافی روی کاغذ. محفظه کروماتوگرافی صعودی و نزولی

در حال حاضر انواع کروماتوگرافی کاغذی زیر ساخته شده است: یک بعدی، دو بعدی، دایره ای و الکتروفورتیک. تک بعدی و دو بعدی در دو نسخه انجام می شود (شکل 6). جریان حلال صعودی و نزولی

شکل 6

کروماتوگرافی صعودی یک بعدی.(شکل 6 الف). 1-5 میکرولیتر از محلول آزمایش را با استفاده از مویین روی نوار کاغذ کروماتوگرافی بمالید. 2 سانتی متر از لبه پایین. اگر فاز ثابت آب باشد، کاغذ به طور خاص درمان نمی شود، زیرا کاغذ خشک شده در هوا حاوی حداکثر 20 تا 22 درصد رطوبت است. فاز متحرک، اشباع شده با فاز ساکن، بر روی کف ظرف کروماتوگرافی (در یک سیلندر یا لوله آزمایش) ریخته می شود.

یک نوار کاغذ با لبه پایین به داخل پایین می آید مایع، و لبه بالایی به گونه ای ثابت می شود که کاغذ آزادانه بدون تماس با دیواره های ظرف آویزان شود. تحت تأثیر نیروهای مویرگی، مایع متحرک کاغذ را بالا می برد و اجزای مخلوط را جدا می کند، که در مقادیر مختلف RFبا سرعت نابرابر روی یک لایه کاغذ حرکت کنید. آزمایش زمانی کامل در نظر گرفته می شود که قسمت جلوی فاز متحرک تقریباً به لبه بالایی نوار کاغذی برسد. پس از این، کروماتوگرام از ظرف خارج می شود، خط جلو علامت گذاری می شود، خشک می شود و توسعه می یابد.

عرض نوار معمولاً در صورت استفاده از یک نمونه 2 تا 5 سانتی متر است. طول آن با شرایط جداسازی تعیین می شود. هنگام کروماتوگرافی تعدادی محلول به طور همزمان، یک نوار کاغذ پهن بردارید. یک خط شروع در امتداد لبه پایینی آن کشیده می شود که محلول های آزمایشی با یک مویرگی در فاصله 2-3 سانتی متر از یکدیگر روی آن اعمال می شوند.

کروماتوگرافی نزولی یک بعدی.

در قسمت بالایی سیلندر (شکل 6b را ببینید) یک حمام کوچک ثابت شده است که در آن یک حلال متحرک، اشباع شده با یک حلال ثابت، ریخته می شود. یک بطری حاوی یک حلال ثابت اشباع شده با یک حلال متحرک در پایین سیلندر قرار می گیرد. این یک جو بخار غنی در سیلندر ایجاد می کند و از تبخیر حلال از کاغذ جلوگیری می کند.

یک قطره از محلول آزمایش به یک نوار کاغذ در فاصله 5 سانتی متری از لبه بالایی اعمال می شود. لبه نوار در حمام فاز متحرک غوطه ور است. حلال از حمام تحت تأثیر نیروهای مویرگی و گرانش به سمت پایین کاغذ جریان می یابد. آزمایش زمانی کامل در نظر گرفته می شود که جلوی حلال به 3-5 سانتی متر از لبه پایینی کاغذ برسد.

کروماتوگرافی دایره ای. برای بدست آوردن کروماتوگرام دایره ای، یک قطره از محلول آزمایش را به مرکز دایره کاغذ کروماتوگرافی اضافه می کنند. انجام کار در خشک کن راحت است. قطر دایره کاغذ باید 2-3 سانتی متر بزرگتر از قطر سطح باریک پایینی خشک کن باشد. دایره روی قسمت باریک خشک کن قرار می گیرد که مخلوطی از حلال های ثابت و متحرک درون آن ریخته می شود. برای تامین حلال، نواری را از لبه دایره به مرکز ("فتیله") به صورت دایره ای برش دهید، آن را به سمت پایین خم کنید و داخل حلال پایین بیاورید. در کروماتوگرام حاصل، مواد جدا شده دایره های متحدالمرکز تشکیل می دهند.

کروماتوگرافی دو بعدی.اگر امکان جداسازی مخلوط پیچیده با یک حلال وجود نداشته باشد، به ترتیب از دو حلال با ضرایب توزیع متفاوت استفاده می شود.

برای کروماتوگرافی دو بعدی از ورق های مربعی به ابعاد 20×20، 30×30، 40×40 سانتی متر استفاده می شود که در ابتدای آزمایش محلول آزمایشی در گوشه سمت چپ آن به فاصله 5 سانتی متر از سمت چپ و از سمت چپ بر روی کاغذ اعمال می شود. لبه های پایین پس از خشک شدن لکه، کاغذ را در ظرف کروماتوگرافی قرار داده، لبه زیرین را در یکی از حلال های انتخاب شده فرو برده و با روش صعودی کروماتوگرافی می شود. پس از خشک شدن، کاغذ را 90 درجه در خلاف جهت عقربه های ساعت می چرخانند، در ظرف کروماتوگرافی جدید حاوی حلال دوم قرار می دهند و با استفاده از روش صعودی کروماتوگرافی می شوند. پس از توسعه، کروماتوگرام دو بعدی به دست می آید.

کاغذ برای کروماتوگرافیدر کروماتوگرافی پارتیشن، الزامات زیر بر روی کاغذ تحمیل می شود: باید از نظر شیمیایی خالص، از نظر شیمیایی و جذب خنثی، چگالی یکنواخت، و سرعت معینی از حرکت حلال را فراهم کند. در اتحاد جماهیر شوروی، چهار گرید کاغذ کروماتوگرافی تولید می شود: شماره 1، 2، 3، 4. هر عدد از نظر چگالی و در نتیجه سرعت حرکت حلال با دیگری متفاوت است. به کاغذ شماره 1 و 2 "سریع" و شماره 3 و 4 "آهسته" می گویند. کاغذ کروماتوگرافی باید دارای مقدار کافی فاز ثابت باشد. کاغذهای معمولی آبدوست هستند، بنابراین اگر از آب به عنوان فاز ثابت استفاده شود، نیازی به مرطوب کردن خاص کاغذ نیست.

برای جداسازی مخلوط های معینی از ترکیبات آلی نامحلول در آب، بهتر است کاغذ آبدوست را به کاغذ آبگریز تبدیل کنید. برای انجام این کار، کاغذ با تیمار 10 گرم کاغذ با مخلوطی از 9 میلی لیتر انیدرید استیک، 100 میلی لیتر اتر نفتی و 8-10 قطره اسید سولفوریک غلیظ استیله می شود. پس از استیلاسیون، کاغذ با مواد مختلف آبگریز (1% محلول پارافین در اتر نفتی، 0.5% محلول لاستیک در بنزن و غیره) آغشته می شود. انتخاب صحیح حلال ها برای جداسازی مخلوط با کروماتوگرافی روی کاغذ از اهمیت بالایی برخوردار است. روی میز جدول 7 فازهای متحرک را نشان می دهد که اغلب در کروماتوگرافی کاغذی برای جداسازی مخلوط ها (فاز ثابت - آب) استفاده می شود.

توسعه کروماتوگرام های کاغذی. در بیشتر موارد، کروماتوگرام روی کاغذ پس از خشک شدن بی رنگ می ماند. بنابراین، کروماتوگرام های حاصل نمایش داده می شوند. برای این منظور از محلول هایی از مواد مختلف استفاده می شود که در طی برهمکنش آنها با اجزای مخلوط مورد تجزیه و تحلیل، ترکیبات رنگی تشکیل می شود. مواد موجود در کروماتوگرام توسعه‌یافته را می‌توان به‌طور کیفی با لومینسانس در نور فرابنفش شناسایی کرد.

برای شناسایی اجزای یک مخلوطروش "شاهد" در کروماتوگرام استفاده می شود. این روش مبتنی بر این واقعیت است که ضریب توزیع RFعملاً مستقل از حضور مواد خارجی است.

فرآیند کروماتوگرافی که روی یک ورق کاغذ صافی در حین حرکت در امتداد مویرگ‌های آن و سطح فاز متحرک اتفاق می‌افتد.

کروماتوگرافی کاغذی نامیده می شود.

فاز ساکن یا خود کاغذ است یا مواد

جوش بر روی الیاف آن اعمال می شود. مکانیسم کروماتوگرافی کاغذی می تواند پارتیشن، جذب یا تبادل یونی باشد. دوباره

حرکت فاز متحرک یا فقط تحت عمل مویرگی اتفاق می افتد

نیروها (کروماتوگرافی صعودی)، یا تحت تأثیر نیروهای مویرگی و گرانش (کروماتوگرافی نزولی).

در طول کروماتوگرافی، مواد مورد تجزیه و تحلیل بر روی باکال تشکیل می شوند

لکه های گرد یا بیضی شکل (مناطق). مجموعه ای از نقاط به دست آمده در طول کروماتوگرافی یک نمونه تجزیه و تحلیل داده شده، کروماتوگرافی نامیده می شود

ماتوگرام

تحرک یک ماده در طول کروماتوگرافی مشخص می شود

Rf متریک، که نسبت فاصله از خط شروع به مرکز نقطه آنالیت به فاصله از خط شروع تا خط مقدم فاز متحرک است (به مونوگرافی عمومی فارمکوپه "کروماتوگرافی" مراجعه کنید).

اصالت ماده مورد تجزیه و تحلیل در همان زمان مشخص می شود

کروماتوگرافی بر روی یک ورق کاغذ از آنالیز و استن-

ماده هدیه اگر نمونه ها یکسان باشند، نقاط مربوطه روی کروماتوگرام ها ظاهر یکسان و مقادیر Rf برابر دارند. برای شناسایی

برای این منظور، گاهی اوقات توصیه می شود مخلوطی از مقادیر مساوی از آنالیت و ماده استاندارد را کروماتوگرافی کنید. کروماتوگرام باید نشان دهد

یک نقطه بدهید شرایط کروماتوگرافی باید طوری انتخاب شود که

به طوری که مقادیر Rf با 0 و 1 متفاوت است.

هنگام آزمایش خلوص، ناخالصی ها و ماده اصلی باید مقادیر Rf متفاوتی داشته باشند. در این مورد می توان در مورد درجه خلوص آنالیت قضاوت کرد.

ماده مورد تجزیه و تحلیل بر اساس اندازه و شدت رنگ (یا جذب)

لکه های ناخالصی در کروماتوگرام تشخیص داده شد. میزان ناخالصی را می توان به صورت نیمه کمی تعیین کرد. برای انجام این کار، روی یک ورق کاغذ -

gi به طور همزمان مقدار معینی از تجزیه و تحلیل شده را کروماتوگرافی می کند

ماده و چند نمونه از ناخالصی تعیین شده (شاهد) ج

غلظت های متفاوت و دقیقاً شناخته شده محتوای یک ناخالصی در نمونه آنالیز شده با مقایسه لکه آن در کروماتوگرام بر اساس ترکیب ناحیه لکه و شدت رنگ (یا جذب) با

شاهد نقاط اگر لکه های ناخالصی به اندازه کافی شبیه شکل و تقریباً باشند.

رنگ با لکه های ماده اصلی، به همان مقدار، مجاز است

می توان از مقادیر مناسبی از ماده اصلی استفاده کرد

به عنوان شاهد

برای تجزیه و تحلیل کمی از چگالی سنج اسپکتروفتومتری یا ویدئویی استفاده می شود. برای پردازش کروماتوگرام ها در ناحیه مرئی، ویژه

استفاده از اسکنرهای تخت و نرم افزار مناسب توصیه می شود.

همچنین امکان تعیین کمیت مواد پس از استخراج آنها از کروماتوگرام وجود دارد. برای انجام این کار، لکه ها بریده شده و استخراج می شوند

ماده در حال جدا شدن محتوای آنالیت در عصاره یا باقیمانده خشک پس از تقطیر حلال با هر روشی تعیین می شود.

مناسب برای تعیین غلظت های پایین

تجهیزات

برای انجام کروماتوگرافی روی کاغذ از کاغذ مهر و موم شده استفاده می شود.

اتاق های حمام ساخته شده از مواد بی اثر و اجازه می دهد

پیشرفت فرآیند جداسازی را با درب محفظه بسته نظارت کنید. غالباً از لیوان یا سیلندرهای شیشه ای با عناصر ورودی به عنوان محفظه استفاده می شود.

با درب جعلی و علاوه بر آن مهر و موم شده است. درپوش ممکن است دارای سوراخ های ورودی (دروازه) برای افزودن حلال یا کاهش فشار اضافی در محفظه باشد.

هنگام انجام کروماتوگرافی نزولی، ظرفی برای فاز متحرک (قایق) در قسمت بالایی محفظه قرار می گیرد. قایق باید دارای حجمی از فاز متحرک باشد که حداقل یک فاز را انجام دهد

کروماتوگرافی چندگانه طول قایق باید از عرض بیشتر باشد

خوب، یک ورق کاغذ کروماتوگرافی. دوربین باید مجهز باشد

دستگاه هایی برای تثبیت ورق کاغذ کروماتوگرافی در ناحیه کار

موقعیت و برای معرفی فاز متحرک به قایق.

هنگام انجام کروماتوگرافی صعودی، فاز متحرک قرار می گیرد

یا در قایق نصب شده در پایین محفظه بریزید یا بریزید

به پایین اتاقک

دیواره های داخلی محفظه با کاغذ صافی پوشانده شده است که اشباع سریع و کامل محفظه با بخارات حلال را تسهیل می کند.

لی در فاز سیار گنجانده شده است.

تهیه تجهیزات، کاغذ کروماتوگرافی و فاز متحرک در تک نگاری های خصوصی داروسازی آورده شده است.

1.2. کروماتوگرافی لایه نازک (OFS 42-0094-09)

فرآیند کروماتوگرافی در یک لایه نازک جاذب که بر روی یک تکیه گاه جامد بی اثر (شیشه، فلز یا پلیمر) قرار گرفته است.

نوترون)، کروماتوگرافی لایه نازک یا کروماتوگرافی لایه نازک نامیده می شود

com لایه جاذب (TLC).

جداسازی را می توان با مکانیسم های مختلفی انجام داد: جذب

یون، توزیع، جفت یون، تبادل یونی، حذف

nomu (ژل نافذ)، کایرال، یا هر ترکیبی از آنها.

در نتیجه حرکت آنالیت و شوینده تحت تأثیر

عمل نیروهای مویرگی، مخلوط مواد مورد مطالعه را به اجزای آن جدا می کند. هنگامی که مواد جدا می شوند، مواد جاذب روی سطح ایجاد می کنند.

لکه ها یا راه راه های گرد یا بیضی شکل (مناطق کروماتوگرافی).

تحرک یک ماده در حین جداسازی با مقدار Rf مشخص می شود

و Rs (نگاه کنید به مونوگراف عمومی فارمکوپه "کروماتوگرافی"، معادله 6 و شکل 1.4).

پارامترهای Rf و Rs برای شناسایی مواد و ارزیابی توانایی جداسازی سیستم استفاده می‌شوند.

تست اصالت (شناسایی) تجزیه و تحلیل کرد

مواد با کروماتوگرافی همزمان از همان مقدار آنالیت و یک نمونه استاندارد روی همان کروماتوگرام انجام می شود. علاوه بر این، اگر مواد یکسان باشند، مناطق کروماتوگرافی مربوطه دارای شکل و شدت یکسانی هستند.

جذب یا رنگ و مقادیر مساوی Rf.

هنگامی که برای خلوص آزمایش می شودماده اصلی و ناخالصی ها در شرایط کروماتوگرافی باید مقادیر Rf متفاوتی داشته باشند. در این مورد، می توان درجه خلوص ماده مورد تجزیه و تحلیل را بر اساس اندازه و شدت قضاوت کرد

لکه های ناخالصی که روی کروماتوگرام شناسایی می شوند. محتوای آنها را می توان به صورت نیمه کمی تعیین کرد. برای انجام این کار، مقادیر مشخصی از آنالیت و شاهد بر روی صفحه اعمال می شود. برای تعیین

تقسیم ناخالصی های شناسایی شده، نمونه های استاندارد ناخالصی های شناسایی شده به عنوان شاهد در مقادیر مربوط به

مطابق با محتوای نهایی آنها. برای تعیین غیر قابل شناسایی

از ناخالصی ها، محلول های مرجع اغلب استفاده می شود، آماده می شود

با رقیق کردن محلول آزمایش همانطور که در خصوصی مشخص شده است رقیق می شود

مقاله ماکوپن. محتوای ناخالصی در ماده مورد تجزیه و تحلیل تخمین زده می شود

آنها با مقایسه ناحیه ناخالصی از نظر مجموع اندازه و شدت آن با نقاط مربوط به شاهد انجام می شوند.

کمی سازیمواد موجود در کروماتوگرام انجام می شوند،

معمولاً به روش چگالی سنجی

وسایل و مواد اولیه:

– صفحات با یک لایه ثابت جاذب با تغییرات مختلف؛

– اتاق های کروماتوگرافی؛

– مویرگ ها و میکروسرنگ های کالیبره شده؛

– دستگاه‌هایی برای استفاده از معرف‌های تشخیص در کروماتوگرام -

محصولات (اسلحه اسپری، محفظه های غوطه وری کروم)

ماتوگرام در محلول و غیره)؛

– مواد استاندارد،حلال ها، معرف هایی برای تشخیص کروم

مناطق توتوگرافی؛

اولتراشیمی‌سکوپی با لامپ‌های UV در طول موج‌های 254 و 365 نانومتر.

لامپ مورد استفاده باید آزمایش زیر را داشته باشد.

بررسی عملکرد لامپ 5 میکرولیتر سیلیکاژل G روی صفحه اعمال می شود

محلول 0.04 درصد سدیم سالیسیلات در الکل 96 درصد برای لامپ های با حداکثر و 3-

تابش 254 نانومتر یا 5 میکرولیتر محلول 0.2 درصد سدیم سالیسیلات در الکل

96% برای لامپ هایی با حداکثر تابش در 365 نانومتر به شکل نقطه ای با قطر حدود 5 میلی متر. نقطه باید بدرخشد

هنگام انجام تجزیه و تحلیل، فاصله بین لامپ و کروماتوگرافی

شانه نباید از فاصله استفاده شده در هنگام بررسی عملکرد لامپ تجاوز کند.

توجه داشته باشید. الکل مورد استفاده باید عاری از مواد فلورسنت باشد.

صفحات کروماتوگرافی

صفحه TLC یک تکیه گاه جامد (شیشه ای است

فلز، فلز یا پلیمر) با یک لایه جاذب اعمال شده است. به من-

ضخامت لایه جاذب از 0.1 تا 0.25 میلی متر برای نسخه تحلیلی و از 0.5

تا 2.0 میلی متر برای آماده سازی.

صفحات کروماتوگرافی آماده ممکن است حاوی فلورسنت باشند

نشانگر تشخیص موادی که UV را جذب می کنند

مناطق طیفی در 254 و 365 نانومتر.

اندازه ذرات جاذب برای نسخه تحلیلی TLC است

5-20 میکرومتر در کنار چنین صفحاتی می توانید از کارایی بالا استفاده کنید

صفحات کروماتوگرافی tive حاوی یک جاذب با ذرات 5-7 میکرومتر در اندازه. چنین صفحاتی امکان افزایش راندمان جداسازی و کاهش حد تشخیص نواحی کروماتوگرافی را فراهم می کند.

صفحات با جاذب و صفحات یکپارچه نیز تولید می شود

کی با منطقه متمرکز (صفحات دو فاز). آخرین استفاده

در تجزیه و تحلیل دارویی برای جدا کردن مخلوط های پیچیده و ناهمگن (عصاره از مواد خام دارویی گیاهی، محلول های قرص،

جریان با اجزای کمکی، اشکال دوز نرم، مخلوط

اتاق های کروماتوگرافی

اتاق های کروماتوگرافی برای عمودی یا افقی استفاده می شود

شستشوی ناحیه ای با درب های مهر و موم شده. دوربین های افقی

شستشوی تال مجهز به دستگاه هایی برای تامین مایع شوینده به صفحه می باشد. قبل از تجزیه و تحلیل، دیواره های داخلی محفظه معمولاً با کاغذ صافی مرطوب شده با فاز متحرک پوشانده می شود. برای شستشوی عمودی، از محفظه هایی با پارتیشن در مرکز پایین استفاده می شود.

استفاده از محفظه شستشو افقی امکان شستشوی همزمان از دو طرف صفحه را فراهم می کند.

بد بو، که بهره وری تجزیه و تحلیل را در مقایسه با

با استفاده از یک محفظه شستشوی عمودی. این نیز مصرف فاز سیار را تقریباً 10 برابر کاهش می دهد. در هفتم -

در یک محفظه افقی، حرکت فاز متحرک در امتداد صفحه فقط به دلیل نیروهای مویرگی رخ می دهد، هیچ کمکی از گرانش وجود ندارد، که باعث افزایش راندمان جداسازی در مقایسه با محفظه های عمودی می شود.

شستشوی کالری

فازهای موبایل (MP)

فازهای متحرک (شوینده ها) ترجیحاً باید جریان کم باشند

نه با جاذب (NF، فاز ثابت) و نه با اجزای جداکننده

مخلوط های من PF همچنین باید به سرعت از سطح کروماتوگرام ها پس از شستشو تبخیر شود.

برای سرکوب تفکیک مولکول های قطبی اجزای جداسازی

مواد اسیدی یا بازی به مخلوطی که ریخته می شود اضافه می شود

(اصلاح کننده ها).

کاربرد نمونه ها

اگر این مورد در تک نگاری های داروسازی خصوصی نشان داده شده باشد، صفحات قبل از

به طور کامل با حلال شسته شده و با حرارت دادن به مدت 1 ساعت فعال می شود

در دمای 100-105 درجه سانتیگراد در کابینت خشک کن. قبل از استفاده از نمونه ها، صفحات باید در یک خشک کن مهر و موم شده نگهداری شوند. کاربرد نمونه ها

خود نمایی کردن:

– مویرگهای کالیبره شده با انتهای صاف؛

– میکروسرنگ های پیستونی با انتهای سوزن صاف؛

– اپلیکاتورهای نیمه اتوماتیک یا اتوماتیک.

کاربرد به دو روش انجام می شود: به صورت لکه هایی (قطر 2-5 میلی متر).

متر) با فواصل بین لکه ها حداقل 10 میلی متر و به صورت نوارهای بلند

از 10 تا 20 میلی متر با فاصله بین آنها حداقل 10 میلی متر. فاصله خط شروع از لبه پایین صفحه باید حداقل 10 میلی متر باشد.

برای جلوگیری از "اثرات لبه" فرسایش جبهه PF در طول فرآیند شستشو،

قبل از استفاده از نمونه ها، هر دو طرف طرح را خراش دهید.

لایه بدبو جاذب به عرض 2-3 میلی متر. فواصل روی خط شروع از لبه های جانبی صفحه تا مکان هایی که اولین و آخرین نمونه ها در آن اعمال می شود باید باشد.

ما باید حداقل 10 میلی متر باشیم. در طول استفاده از نمونه ها، غیر قابل قبول است

آسیب به جاذب در خط شروع. خشک کردن نمونه های اعمال شده

در جریان هوای سرد یا گرم یا روی میز مخصوص گرمایش الکتریکی اجرا کنید.

روش های شستشو

از روش های شستشوی زیر استفاده می شود: شستشوی صعودی

حرکت (تک مرحله ای و چند مرحله ای، یک بعدی و دو بعدی - با چرخش صفحه

دیوارها در 90 یا 180) و افقی.

کروماتوگرافی صعودی

مگر اینکه در یک مونوگراف خصوصی داروسازی مشخص شده باشد، پلیت با نمونه های اعمال شده به صورت عمودی در محفظه قرار داده می شود.

با بخارات PF به مدت 1 ساعت در دمای 20-25 درجه سانتیگراد اشباع شده است. سطح PF باید در زیر خط شروع قرار گیرد. محفظه بسته شده و فرآیند در آن انجام می شود

20-25 درجه سانتیگراد در مکانی محافظت شده از نور. پس از عبور از جبهه PF،

با ایستادن مشخص شده در تک نگاری خصوصی، صفحه از محفظه خارج می شود، خشک می شود و تحت شرایط مقرر توسعه می یابد.

هنگام انجام کروماتوگرافی دو بعدی، صفحه بعد از کروماتوگرافی در جهت اول خشک شده و در جهت عمود بر اول کروماتوگرافی می شود.

کروماتوگرافی افقی

صفحه با نمونه های اعمال شده در محفظه قرار می گیرد و به داخل هدایت می شود

جریان PF از سینی به محفظه طبق دستورالعمل دستگاه برای شستشوی افقی. این فرآیند در دمای 20 تا 25 درجه سانتیگراد انجام می شود (اگر این در خصوصی نشان داده شده باشد

مقاله ماکوپن، به طور همزمان از طرف مقابل صفحه). شرکت

جایی که PF از فاصله مشخص شده در تک نگاری فارماکوپه خصوصی عبور می کند، pla-

فیلم برداشته می شود، خشک می شود و تحت شرایط تجویز شده توسعه می یابد.

کروماتوگرافی دو بعدی همانطور که در بخش "بازیابی" توضیح داده شده انجام می شود.

کروماتوگرافی فعلی".

روش های تشخیص

تشخیص (تشخیص) مناطق کروماتوگرافی پس از آزمایش

تست های کیفی و نیمه کمی TLC به روش های زیر انجام می شود:

- مشاهده زیر نور UV؛

– پاشش با محلول های معرف های تشخیص؛

– با نگه داشتن معرف آشکارساز در بخار؛

– غوطه وری در محلول های معرف های تشخیص در محفظه های ویژه.

کروماتوگرافی لایه نازک با کارایی بالا (HPTLC)

راندمان جداسازی هم به دلیل افزایش سطح جدایی بین فاز متحرک و ثابت به دلیل کاهش قطر افزایش می یابد.

متر ذرات جاذب و به دلیل یکنواختی بیشتر اندازه این ذرات. از صفحات HPTLC ساخته شده به طور معمول استفاده کنید

تغییرات فاز (NF قطبی) و فاز معکوس (NF غیر قطبی).

در مقایسه با TLC کلاسیک، استفاده از صفحات با کارایی بالا اجازه می دهد:

– با کاهش قطر نقاط شروع، تعداد نمونه های آنالیز شده را افزایش دهید (تا 1-2 میلی متر) یا طول نوار (تا 5-10 میلی متر)؛

– فاصله بین نقاط شروع (تا 5 میلی متر) را کاهش دهید.

– کاهش زمان کروماتوگرافی با کاهش محدوده جلوی فاز متحرک (MP).

– کاهش مصرف (حجم) PF؛

- محدودیت های تشخیص لکه ها و تعیین کمی آنالیت ها را 10-100 برابر کاهش دهید.

استفاده از HPTLC تولید لکه های فشرده تر از ترکیبات جدا شده را تضمین می کند که ویژگی های مترولوژیکی کمیت را بهبود می بخشد.

تعیین دقیق با استفاده از کروماتودنسیتومتری روبشی

در کروماتوگرافی کاغذی، فاز مایع ثابت آب است که توسط الیاف کاغذ تا 20 درصد جذب می شود یا یک حلال قطبی دیگر. بوتیل الکل، کلیدین، فنل و کرزول ها اغلب به عنوان فاز متحرک استفاده می شوند. حامل کاغذ فیلتر شده خوبی است که از نظر ضخامت و چگالی نسبتاً یکنواخت است.

برای جداسازی مخلوط با استفاده از کروماتوگرافی کاغذی، یک قطره از محلول آزمایشی روی نوار کاغذ صاف شده به عرض 20-15 میلی متر و طول 300-500 میلی متر در فاصله 30-20 میلی متر از انتهای آن قرار می گیرد. انتهای نوار در یک حلال آلی مناسب که قبلاً با آب اشباع شده بود غوطه ور می شود و کل دستگاه در یک محفظه مهر و موم شده قرار می گیرد که جو آن با بخارات یک حلال آلی و آب اشباع شده است. حرکت حلال در امتداد نوار کاغذ، به دلیل نیروهای مویرگی، توسعه کروماتوگرام را تضمین می کند، با مناطق جداگانه حرکت با سرعت های مختلف.

کروماتوگرافی کاغذی دو بعدی

حتی نتایج دقیق تری با استفاده از کروماتوگرافی کاغذی به اصطلاح دو بعدی به دست می آید. برای این گزینه، از نوارهای کاغذ صاف شده استفاده نکنید، بلکه از مستطیل هایی با ابعاد تقریباً 400x500 میلی متر استفاده کنید. یک قطره از محلول آزمایشی در نزدیکی یکی از رئوس مستطیل اعمال می شود و کروماتوگرام دو بار با حلال های مختلف، به عنوان مثال، فنل و کولیدین، ابتدا با یک حلال، و سپس، پس از چرخش 90?، با حلال دیگر توسعه می یابد. .

روش های توسعه کروماتوگرام ها

کروماتوگرافی صعودی کاغذ با انتهای پایینی خود در فاز متحرک غوطه ور می شود. بالا آمدن مایع تحت تأثیر نیروهای مویرگی رخ می دهد.

"+" دستگاه ساده است، ارزیابی کمی از نتایج ممکن است.

"-" گرانش و نیروهای مویرگی در جهت مخالف عمل می کنند. سرعت مکش پس از افزایش تا 20 سانتی متر به طور قابل توجهی کاهش می یابد. قابل استفاده برای مواد با تفاوت نسبتاً زیاد در مقادیر Rf

کروماتوگرافی نزولی کاغذ با انتهای بالایی خود در فاز متحرک غوطه ور می شود. زهکشی مایع تحت تأثیر گرانش رخ می دهد.

"+" - عبور سریع فاز سیار؛ عدم محدودیت در طول مسیر لکه ها (کروماتوگرام جریان). می توان موادی را با مقادیر Rf کمی متفاوت جدا کرد و نتایج را کمی سازی کرد.

"-" - دستگاه پیچیده تر از کروماتوگرافی صعودی است.

برنج. 5.

کروماتوگرافی شعاعی افقی. فاز متحرک به طور مداوم به مرکز یک تکه کاغذ دایره ای اعمال می شود.

"+" - اجرای سریع، مناطق باریک و واضح هستند. کامل بودن جداسازی بیشتر از روش های اول.

"-" - فقط ارزیابی کیفی نتایج ممکن است. استفاده از "شاهد" فقط با به اصطلاح "روش مخفی" (یعنی تقسیم مقاله به بخش ها) امکان پذیر است.

آماده سازی فاز سیار

ساده ترین مورد کروماتوگرافی روی کاغذ در زیر توضیح داده شده است - کروماتوگرافی صعودی با آب به عنوان فاز صعودی.

اجزای سیستم حلال انتخابی با نسبت مشخص شده در یک قیف جداکننده مخلوط می شوند. دو فاز غیر قابل اختلاط با تکان دادن به اشباع متقابل می رسند. فاز ارگانیک به عنوان فاز متحرک عمل می کند.

کاربرد ماده

نواری از نوع خاصی از کاغذ بریده می شود که اندازه آن مطابق با اندازه استوانه مورد استفاده برای کروماتوگرافی است. در فاصله 3 سانتی متری از لبه پایین، یک خط علامت گذاری با مداد اعمال می شود. در این خط، نقاط شروع در فاصله 2 - 2.5 سانتی متر از یکدیگر و از لبه های نوار مشخص شده است. هر نقطه شروع با یک پیپت مخصوص اعمال می شود. این باعث ایجاد لکه هایی به قطر حدود 1 سانتی متر می شود. سپس به حلال اجازه داده می شود تا تبخیر شود.

کاغذ حلال کروماتوگرافی لایه نازک

تجلی

فاز متحرک در ته سیلندر ریخته می شود و یک نوار کاغذ به حالت تعلیق در می آید. بگذارید یک شب آویزان شود و سپس لبه پایین نوار به اندازه 0.5 سانتی متر در فاز متحرک غوطه ور شود. پس از افزایش 20 تا 25 سانتی متری حلال، نوار برداشته می شود، موقعیت جلوی حلال با مداد مشخص می شود و کروماتوگرام خشک می شود.

جشنواره بین المللی "ستارگان قرن جدید" - 2013

علوم طبیعی (14 تا 17 سال)

پروژه دانشجویی

کروماتوگرافی

تکمیل شده توسط: دانش آموز پایه هفتم

بلوخینا تاتیانا

بررسی شده توسط: معلم شیمی

باشگاه شیمیایی منطقه ولخوف

MOBU "مدرسه متوسطه شماره 1 ولخوف"

ولخوف

1. مقدمه…………………………………………………….. صفحه ۳

2. هدف، روشها، مسائل پروژه …………………………………………………………………………………………………

3. و کشف کروماتوگرافی. ……………………..صفحه ۵

4. کروماتوگرافی. روش‌های کروماتوگرافی………………………………………………………………………

5. بخش تجربی………………………………..صفحه ۱۳

6. کاربرد کروماتوگرافی…………………………….ص.

7. ادبیات………………………………………………………………………………………… p.

هدف:برای مطالعه ماهیت یکی از پرکاربردترین روش های تجزیه و تحلیل شیمیایی - کروماتوگرافی، برای انجام آزمایش هایی که می تواند در شرایط مدرسه انجام شود.

مسائل مشکل ساز پروژه:

· کروماتوگرافی چیست؟

چه نوع کروماتوگرافی وجود دارد؟

· کدام یک از آنها را می توان در محیط های مدرسه استفاده کرد؟

· با استفاده از کروماتوگرافی چه موادی را می توان از مخلوط جدا کرد؟

· آیا می توان موادی را که رنگ ندارند تشخیص داد؟

· کدام یک از روش های کروماتوگرافی موجود پیشرفته تر است؟

مراحل پروژه

1. جمع آوری اطلاعات در مورد موضوع پروژه

2. انجام آزمایش

3. نوشتن چکیده و ایجاد یک ارائه

1. معرفی

کروماتوگرافی یکی از رایج ترین روش های آنالیز شیمیایی در تمامی آزمایشگاه های دنیا می باشد. خالق این روش، که یک گیاه شناس بود، دقیقاً به دلیل ایجاد این روش، در میان صد شیمیدان بزرگ تمام دوران نامگذاری شد.

شیمی بیولوژیکی" href="/text/category/biologicheskaya_hiimya/" rel="bookmark">بیوشیمیدان گیاهی. روش تمپوروتاگروفیک را ایجاد کرد. رنگدانه های برگ گیاه را بررسی کرد، کلروفیل های خالص a، b و c و تعدادی ایزومر زانتوفیل را به دست آورد. کشف رنگ از اوایل دهه 1930 در جداسازی و شناسایی رنگدانه های مختلف، ویتامین ها، آنزیم ها، هورمون ها و سایر ترکیبات آلی و معدنی به طور گسترده مورد استفاده قرار گرفت و به عنوان پایه ای برای ایجاد تعدادی از حوزه های جدید شیمی تجزیه ای عمل کرد. (کروماتوگرافی گازی، کروماتوگرافی مایع، کروماتوگرافی لایه نازک).

او حتی یک نام خانوادگی بیولوژیکی گرفت - رنگ ... بالاخره برای گیاهان، گلها جوهر وجود آنها هستند، امید به زندگی ابدی. یا شاید نام خانوادگی منعکس کننده رنگ خاصی از یاس یا توسکا نیست، بلکه سایه، رنگ، رنگ آسمان یا علف را منعکس می کند.
گویی نام خود را در عنوان کشف اصلی خود رمزگذاری کرده بود. کلمه "کروماتوگرافی" از دو ریشه یونانی تشکیل شده است: "chromatos" - رنگ، رنگ آمیزی و "graphia" - ضبط.
میخائیل سمنوویچ در 14 می 1872 در خانواده ای بین المللی متشکل از یک روسی و یک ایتالیایی به دنیا آمد. همانطور که گفته اند این ازدواج از روی عشق بسیار منعقد شده است.
تحصیلات خود را در سوئیس در دانشگاه ژنو گذراند. در آنجا، در سال 1896، Tsvet از پایان نامه خود برای درجه دکترای علوم طبیعی دفاع کرد.
میخائیل سمنوویچ به زبان های آلمانی، فرانسوی، ایتالیایی و انگلیسی مسلط بود. در سال 1897، او به سرزمین تاریخی پدرش، روسیه نقل مکان کرد.
دکتر تسوت برای مدتی در آزمایشگاه بیولوژیکی سنت پترزبورگ که توسط پی. اما ورشو، جایی که دانشمند در سال 1902 به آنجا نقل مکان کرد، شهر شاد او شد. در همان سال، تسوت از پایان نامه کارشناسی ارشد خود با موضوع "ساختار فیزیکوشیمیایی دانه های کلروفیل" دفاع کرد و مقام دانشیار را دریافت کرد.
رنگ اولین کسی بود که ثابت کرد تنها دو تغییر (اصلاح) کلروفیل وجود دارد: کلروفیل A و کلروفیل B. این اتفاق در سال 1903 رخ داد. قبل از این، علم بر این باور بود که هر گیاه حاوی نوع خاص خود از کلروفیل است: توس، گلسنگ، بنفش و غیره. رنگ جستجو برای کلروفیل ها را به دو شکل محدود می کند. و او این کار را با استفاده از روشی که خودش ابداع کرده بود انجام داد.

این روش اساساً جدید، ساده و در عین حال پیچیده بود. پروفسور پودر گچ خالص شده ریز آسیاب شده را در یک لوله شیشه ای ریخت، آن را با بنزن مرطوب کرد و کمی محلول کلروفیل روی آن ریخت. لایه بالایی گچ سبز روشن شد. پس از این، محقق با دقت شروع به اضافه کردن حلال، بنزن، قطره قطره کرد. حلقه سبز رنگ به دنبال حلال شروع به پایین آمدن تدریجی از لوله کرد. و سپس (اوه، معجزه!) میخائیل سمنوویچ متوجه شد که حلقه پهن به چندین حلقه باریک تقسیم شده است. یک نوار زرد ظاهر شد، کندتر از بقیه حرکت کرد و بنابراین در بالای آنها قرار داشت. زیر آن نوارهای زرد-سبز و سبز-آبی متوالی، سپس دو نوار زرد دیگر با عرض های مختلف و زیر همه، یک راه راه زرد روشن قرار داشت. از طریق تجزیه و تحلیل دقیق، محقق تشخیص داد که بالای نوار بالایی نوار دیگری بی رنگ وجود دارد.

برنج. 1. جداسازی کروماتوگرافی

رنگدانه های برگ سبز به دست آمده است

در تجربه رنگ

بنابراین، معلوم شد که یک ماده پیچیده به اجزاء تقسیم می شود، همانطور که پرتوهای نور به یک طیف تجزیه می شوند.
همانطور که قبلا ذکر شد، روش جدیدی برای جداسازی مواد پیچیده به اجزاء، کروماتوگرافی نامیده می شود. این نام حفظ شده است، اگرچه رنگ دیگر نقشی در تکنیک های کروماتوگرافی مدرن ندارد.
اساس این روش چیست؟ محلول عصاره برگ ها با پودر گچ تماس پیدا می کند و تغییر رنگ می دهد و گچ را رنگ می کند (جاذب). تمام ترکیبات موجود در مخلوط روی سطح ذرات جاذب رسوب می کنند. آنها می توانند دوباره به محلول (شوینده) بروند و دوباره روی سطح پودر گچ جذب شوند. فرآیندهای بارش - انحلال (جذب - دفع) بارها در طول حرکت "حلقه" در ستون رخ می دهد.
بین محلول (در بنزن، به عنوان مثال، در Tsvet) و جاذب (گچ)، در نهایت تعادل برقرار می شود: سهم شیر از مولکول های ماده محلول روی سطح ذرات ظاهر می شود و تقریباً هیچ یک از آنها وجود ندارد. در محلول باقی بماند.
راز کروماتوگرافی توسط آن چند مولکول آشکار می شود که همراه با جریان حلال به داخل لوله منتقل می شوند. در طول مسیر، آنها به آرامی دوباره روی ذرات گچ دیگر رسوب می کنند و به جای آن مولکول های جدید وارد محلول می شوند. جریان حلال به طور مداوم از بالا وارد لوله می شود. در قسمت بالایی به تدریج مواد جذب شده کمتر و کمتر می شود و در قسمت پایین - بیشتر و بیشتر.
ترفند این است که مولکول هایی با ساختار یا ترکیبات مختلف به طور متفاوتی روی سطح جاذب جذب می شوند. برخی از آنها قوی تر به گچ می چسبند، برخی دیگر ضعیف تر. برخی از آنها مدت زمان بیشتری در محلول باقی می مانند و کمتر در حالت محدود می مانند، در حالی که برخی دیگر برعکس عمل می کنند. آن دسته از مولکول هایی که مدت طولانی تری در محلول باقی می مانند، سریعتر به سمت پایین ستون حرکت می کنند. به تدریج مخلوط رنگی مواد مختلف به اجزای تشکیل دهنده آن جدا می شود. هر ماده در لایه خاص خود متمرکز شده است. اگر طول ستون (لوله) کافی باشد، اجزای مخلوط کاملاً از یکدیگر فاصله دارند. هر حلقه رنگی مربوط به یک جزء خاص است. و مکان آنها نسبت به یکدیگر یک کروماتوگرام را تشکیل می دهد که با مطالعه آن شیمیدانان تحلیلی می توانند ترکیب ماده را تعیین کنند. و چنین کروماتوگرافی عمودی لقب پایدار "ستون" را دریافت کرد.
با استفاده از کروماتوگرافی ستونی، نه تنها می توانید ترکیب کیفی مخلوطی از مواد را تعیین کنید، بلکه آن را به اجزای تشکیل دهنده نیز جدا کنید، یک به یک "حلقه ها" را با یک حلال در یک ظرف جداگانه بشویید. این روش همچنین برای تصفیه بسیار ریز مواد مناسب است.
میخائیل سمنوویچ پس از کشف خود، بیشتر پیش می رود و زمینه تحقیقات را گسترش می دهد. در دوره 1908 تا 1910، او در مؤسسه پلی تکنیک ورشو به تدریس گیاه شناسی پرداخت و در همان زمان به مطالعه رنگدانه سبز گیاهان ادامه داد. در سال 1910، تسوت از پایان نامه خود برای درجه دکترای گیاه شناسی دفاع کرد. موضوع تحقیق به شرح زیر است: "کلروفیل ها در دنیای گیاهی و جانوری". البته، هنگام انجام آزمایشات، میخائیل سمنوویچ از روش قدرتمند خود استفاده کرد، اما فقط به عنوان یک ابزار، وسیله، و نه هدف. او هرگز به رسمیت شناخته نشد. و او هرگز نمی دانست که کمتر از شش برنده جایزه نوبل اکتشافات خود را مدیون اختراع مبتکرانه او هستند.
از سال 1917، پروفسور تسوت در دانشگاه یوریف (تارتو فعلی) تدریس می کند. اما در سال 1918، جنگ و سختی ها میخائیل سمنوویچ را مجبور کرد به مکان های سودآورتر نقل مکان کند. او شهر ورونژ را چنین می دانست. او آخرین سال زندگی خود را به عنوان استاد در دانشگاه ورونژ گذراند.
در 26 ژوئن 1919، این دانشمند از گرسنگی و بیماری درگذشت، همانطور که بسیاری از مردم روسیه در طول جنگ داخلی جان باختند.
روش میخائیل سمنوویچ تسوت به طور گسترده در بسیاری از زمینه های علم و فناوری استفاده می شود. کروماتوگرافی گاز-مایع، کاغذ، کروماتوگرافی تبادل یونی و کروماتوگرافی لایه نازک ظاهر شد.
با استفاده از کروماتوگرافی تبادل یونی می توانید سختی آب را حذف کرده یا آن را نمک زدایی کنید. او همچنین به جداسازی مخلوطی از ایزوتوپ‌های عناصر کمیاب خاکی کمک کرد. رادیواکتیویته هر قطره محلول که از ستون تبادل یونی جاری می شود به طور جداگانه تعیین می شود. مشخص شد که هرچه عدد اتمی یک عنصر در جدول تناوبی بیشتر باشد، در هنگام جداسازی کروماتوگرافی سریعتر از ستون خارج می شود. تناوب عناصر به طرز شگفت آوری با موقعیت نسبی آنها در جدول تناوبی مطابقت دارد: آمریکیوم (95)، پس از آن کوریم (96)، برکلیم و در نهایت کالیفرنیوم (98).
بنابراین، روش Tsvet در پروژه های اتمی جهانی قرن بیستم شرکت کرد.
در سال 1992، سنگ قبری با سنگ نوشته روی قبر ساده این دانشمند در ورونژ نصب شد: "به او این فرصت داده شد تا کروماتوگرافی را کشف کند، مولکول ها را جدا کند، مردم را متحد کند."

کروماتوگرافی

کروماتوگرافی یک روش آزمایشی برای جداسازی اجزای یک مخلوط بین فاز ثابت (ایستا) و فاز متحرک* است.بر اساس ماهیت فاز ساکن، کروماتوگرافی به دو نوع - جذب و توزیع تقسیم می شود.

در کروماتوگرافی جذب، فاز ساکن یک جامد است. این ماده جامد بخشی از هر جزء را از مخلوط جذب می کند.

جذب یک ماده زمانی اتفاق می افتد که توسط سطح ماده دیگری جذب شود. جذب را نباید با جذب اشتباه گرفت، که زمانی اتفاق می افتد که یک ماده در حجم ماده دیگر منتشر می شود و به جای سطح ماده دوم، توسط کل حجم جذب می شود (شکل 6.40).

در کروماتوگرافی پارتیشن، فاز ساکن یک مایع است. اجزای مخلوط بین این مایع و فاز متحرک توزیع می شوند.

اصل جداسازی کروماتوگرافیدر این واقعیت نهفته است که فاز متحرک به طور مداوم بر روی فاز ساکن حرکت می کند و با وقوع این اتفاق، تحت تأثیر فاز ساکن، اجزای مخلوط روی آن از هم جدا می شوند.

هر دوی این روش‌های کروماتوگرافی پایه شامل دو مرحله اصلی هستند: 1) توزیع اجزای مخلوط بین دو فاز. 2) جداسازی اجزای مخلوط روی یا در فاز ساکن توسط جریان پیوسته فاز متحرک.

آن جزء مخلوط که دارای ضریب توزیع بیشتر D است عمدتاً در فاز متحرک حل می شود و بنابراین به سرعت بالای فاز ساکن حرکت می کند. جزء با ضریب توزیع کمتر D عمدتاً در فاز ثابت جامد جذب یا در فاز ساکن مایع جذب می‌شود. همانطور که فاز متحرک بالای فاز ساکن حرکت می کند، این جزء به آرامی در امتداد فاز ساکن حرکت می کند.

کروماتوگرافی نقش مهمی در سنتز آلی در جداسازی و جداسازی اجزای مخلوط دارد. در تجزیه و تحلیل کمی و کیفی برای شناسایی اجزای جدا شده از یک مخلوط و همچنین برای تعیین فرکانس آنالیت استفاده می شود.

اصطلاح "کروماتوگرافی" ماهیت تکنیک مورد بحث برای جداسازی مخلوط ها را آشکار نمی کند. کلمه کروماتوگرافی در زبان یونانی به معنای نقاشی رنگی است. واقعیت این است که اولین تکنیک های کروماتوگرافی برای جداسازی مخلوطی از مواد رنگی مورد استفاده قرار گرفت.

پنج روش اصلی برای تجزیه و تحلیل کروماتوگرافی وجود دارد:

1. جذب

2. توزیع

3. تبادل یونی

4. رسوبی

5. انحصاری

من. کروماتوگرافی جذبیبر اساس جذب انتخابی اجزای منفرد مخلوط مورد تجزیه و تحلیل توسط جاذب های مناسب است. هنگام کار با این روش، محلول تجزیه و تحلیل شده از یک ستون پر از دانه های جاذب کوچک عبور داده می شود. کروماتوگرافی جذبی برای جداسازی غیر الکترولیت ها، بخارات و گازها استفاده می شود.

II. کروماتوگرافی پارتیشنمبتنی بر استفاده از تفاوت در ضرایب جذب اجزای جداگانه مخلوط مورد تجزیه و تحلیل بین دو مایع غیرقابل اختلاط است. یکی از مایعات (بی حرکت) در منافذ ماده متخلخل (حامل) قرار دارد و دومی (متحرک) حلال دیگری است که با اولی غیرقابل اختلاط است. این حلال با سرعت کم از ستون عبور می کند. مقادیر مختلف ضرایب توزیع سرعت های مختلف حرکت و جداسازی اجزای مخلوط را فراهم می کند. ضریب توزیع یک ماده بین دو حلال غیر قابل امتزاج، نسبت غلظت یک ماده در یک حلال متحرک به غلظت همان ماده در یک حلال ساکن است: (K = Spodv/Snepodv).

گاهی به جای ستون، از نوارها یا ورق های کاغذ صافی که حاوی ناخالصی های معدنی نیستند، به عنوان حامل حلال ساکن استفاده می شود. در این حالت، یک قطره از محلول آزمایش به لبه یک نوار کاغذ که در یک محفظه بسته معلق است، ریخته می شود و لبه آن را با قطره ای از محلول آزمایشی که روی آن اعمال می شود در ظرفی با حلال متحرک پایین می آورد. پیشران)، که با حرکت در امتداد کاغذ، آن را خیس می کند. در این حالت، هر ماده موجود در مخلوط مورد تجزیه و تحلیل با سرعت ذاتی خود در همان جهت حرکت دهنده حرکت می کند. به این نوع کروماتوگرافی پارتیشن، کروماتوگرافی کاغذی می گویند.

نوع خاصی از کروماتوگرافی پارتیشن، کروماتوگرافی گازی مایع (GLC) است. مایعات غیرفرار مختلفی که روی یک حامل جامد خنثی قرار گرفته اند به عنوان فاز ثابت استفاده می شوند. به عنوان یک فاز متحرک - نیتروژن گازی، هیدروژن، هلیوم، دی اکسید کربن و غیره. جداسازی مخلوط ها به روش GLC در ستون هایی انجام می شود که لوله هایی با قطر داخلی 1 - 6 میلی متر و طول 1 - 5 هستند. متر، پر شده با یک حامل بی اثر، به عنوان مثال خاک دیاتومه، مایع غیرفرار آغشته شده، یا مویرگ های فولادی و شیشه ای با قطر 0.2 - 0.3 میلی متر و طول با فاز مایع که روی دیواره های این مویرگ ها رسوب کرده است (گاز مویرگی- کروماتوگرافی مایع).

از آنجایی که تبدیل بسیاری از ترکیبات آلی مانند بیوپلیمرها به فاز گاز دشوار و یا حتی غیرممکن است، از کروماتوگرافی مایع با فشار بالا (کروماتوگرافی مایع مولکولی) برای چنین موادی استفاده می شود. حامل های خنثی با متخلخل ریز پوشیده شده با فیلمی از پلیمرهای مختلف که در حلال های آلی نامحلول هستند به عنوان فاز ساکن استفاده می شود. پرکردن ستون ها (قطر 0.mm) با فاز ساکن تحت فشار در اتمسفر انجام می شود که به همین دلیل یکنواختی و تراکم پر شدن و در نتیجه راندمان جداسازی حاصل می شود. شستشوی مواد جدا شده با عبور دادن هر حلال آلی مناسب یا مخلوطی از آنها تحت فشار وات از ستون انجام می شود.

III. کروماتوگرافی تبادل یونیمبتنی بر استفاده از فرآیندهای تبادل یونی است که بین یون های متحرک جاذب و یون های الکترولیت هنگام عبور محلول آنالیت از طریق ستونی پر از ماده تبادل یونی (مبدل کننده یون) اتفاق می افتد. مبدل های یونی ترکیبات غیر آلی و آلی غیرمحلول با مولکولی بالا هستند که حاوی گروه های فعال (یون زا) هستند. یون های متحرک این گروه ها قادر به تبادل کاتیون ها یا آنیون های ماده محلول در تماس با محلول های الکترولیت هستند. اکسید آلومینیوم (برای کروماتوگرافی)، پرموتین، کربن سولفونه و مواد مختلف تبادل یونی - رزین های تبادل یونی به عنوان مبدل یونی استفاده می شود. مبدل های یونی به مبدل های کاتیونی با قابلیت تبادل کاتیونی تقسیم می شوند (حاوی گروه های فعال: - SO3H، - COOH، - OH). مبدل های آنیونی که قادر به تبادل آنیون هستند (گروه های فعال: - NH2، =NH). آمفولیت ها مواد تبادل یونی با خواص آمفوتریک هستند.

قطعه کاتیونیت: تبادل کاتیونی: RH + KtAn = RKt + Han

قطعه مبدل آنیونی: تبادل آنیون: ROH + HAn = RAN + H2O

IV. کروماتوگرافی رسوبیبر اساس حلالیت متفاوت رسوبات تشکیل شده توسط اجزای مختلف مخلوط مورد تجزیه و تحلیل با معرف های ویژه اعمال شده بر روی یک ماده بسیار پراکنده است. محلول های تجزیه و تحلیل شده از طریق یک ستون پر از یک ماده متخلخل (حامل) عبور داده می شود. حامل با یک معرف رسوب‌دهنده آغشته می‌شود که با یون‌های محلول، رسوب‌هایی با حلالیت‌های متفاوت ایجاد می‌کند. رسوبات تشکیل شده، بسته به حلالیت، در یک توالی مشخص در امتداد ارتفاع ستون قرار دارند.

V. انحصاریکروماتوگرافی (الک مولکولی) بر اساس نفوذپذیری متفاوت مولکولهای جزء به فاز ساکن (ژل غیریونی بسیار متخلخل) است. کروماتوگرافی حذف اندازه به کروماتوگرافی نفوذ ژل (GPC) تقسیم می شود که در آن ماده شوینده یک حلال غیر آبی است و فیلتراسیون ژل که در آن مایع شوینده آب است.

بخش تجربی

(کروماتوگرافی کاغذی، کروماتوگرافی ستونی، کروماتوگرافی لایه نازک)

1. کروماتوگرافی کاغذی

مخلوط های زیر را با استفاده از کروماتوگرافی کاغذی جدا کنید:

الف) نشانگر سبز

ب) خودکار آبی.

هدف آزمایش:بر روش کروماتوگرافی کاغذی مسلط شوید، یاد بگیرید که تفاوت بین مواد خالص و مخلوط را تعیین کنید.

تجهیزات: یک لیوان آب، یک نوار کاغذ صافی (10 سانتی متر در 2 سانتی متر)، یک خودکار نمدی سبز. در فاصله 2 سانتی متری از انتهای نوار، یک خط افقی با نوک نمد (به موازات ضلع کوچکتر) بکشید. لازم است این انتهای را به داخل آب پایین بیاورید تا خط کشیده شده بالای سطح آب باشد. مشاهده می کنیم که چگونه نوار کاغذی خیس می شود، آب در امتداد آن بالا می رود، به خط کشیده شده می رسد و رنگ را با خود حمل می کند.

و سپس خواهیم دید که چگونه خط سبز تار می شود و در بالا دو رنگ می شود - آبی، زیر - سبز. این آزمایش این امکان را به وجود آورد که مشخص شود رنگ سبز قلم نمدی در واقع از دو رنگ تشکیل شده است.

رنگ آبی هم جدا شد.

اظهار نظر: از قلم های نمدی با جوهر محلول در آب استفاده کنید(نه نشانگر برای امضای دیسک)، از دستمال توالت استفاده نکنید - آب خیلی سریع بالا می رود و تصویر تار می شود. می توانید دستمال کاغذی را امتحان کنید. اگر کاغذ صافی وجود ندارد، می توانید حاشیه های روزنامه را قطع کنید (فقط زمان بیشتری صرف مشاهده می شود).

2. ساخت ستون کروماتوگرافی

به عنوان ستون کروماتوگرافی از لوله های شیشه ای با قطر 6=8 میلی متر و طول 12-15 سانتی متر استفاده می کنیم.

یک سواب پنبه ای کوچک را در انتهای لوله قرار دهید. ستون را با یک جاذب خشک - اکسید آلومینیوم تا نیمه پر می کنیم. پودر جاذب را فشرده می کنیم. ستون را در پایه سه پایه ثابت می کنیم.

در بارهشکنجه جداسازی مخلوطی از کاتیون ها در یک ستون کروماتوگرافی

ما محلول های کلرید آهن (III)، سولفات مس (II)، کلرید کبالت (II) را می گیریم. رنگ های این محلول ها عبارتند از: زرد، آبی، صورتی. 10 قطره از هر محلول را داخل لیوان بریزید و با میله شیشه ای مخلوط کنید. ۱ میلی لیتر از مخلوط را پیپت کرده و به آرامی قطره قطره در ستون کروماتوگرافی بریزید. هر قسمت از مایع را فقط پس از جذب قسمت قبلی اضافه کنید. پس از مدتی، حلقه های رنگی یون های جذب شده در ستون ظاهر می شوند. برای توزیع واضح تر حلقه های رنگی، 3-4 قطره آب به ستون کروماتوگرافی اضافه کنید. بر اساس رنگ زون ها محل کاتیون ها را در ستون با جاذب تعیین می کنیم.

https://pandia.ru/text/78/355/images/image011_20.jpg" align="left" width="227" height="303 src=">

اخذ شده کروماتوگراممو- این نام نتیجه کروماتوگرافی انجام شده است - و نشان دهنده توزیع کاتیون ها است.

بنابراین، کروماتوگرافی به شما اجازه می دهد تا به سرعت مخلوطی متشکل از اجزایی با خواص مشابه را جدا کنید.

برای انجام کروماتوگرافی، نه تنها اکسید آلومینیوم، بلکه از مواد دیگری مانند اکسید منیزیم، نشاسته و کربنات کلسیم نیز می توان به عنوان جاذب استفاده کرد. دومی جزء اصلی پوسته تخم مرغ است.

تجربه جداسازی مخلوطی از کاتیون ها به پوسته تخم مرغ

بیایید نصف پوسته تخم مرغ را که قبلا از فیلم پاک شده است، برداریم. با استفاده از یک سواب پنبه ای آغشته به اتیل الکل، سطح داخلی آن را پاک کنید. بیایید مخلوطی از محلول‌های سه نمک (FeCl3، CuS04، CoC12) را که برای آزمایش قبلی آماده شده‌اند، در نظر بگیریم. یک قطره از مخلوط را به داخل پوسته بمالید. وقتی مایع جذب شد، یک قطره دیگر از این مخلوط را در همان محل بچکانید. پس از جذب مایع، یک قطره آب به مرکز لکه اضافه کنید. از کروماتوگرام حاصل عکس می گیریم.

بیایید مکان مناطق رنگی روی پوسته را با نتیجه آزمایش قبلی مقایسه کنیم. شباهت در ترتیب چینش مناطق رنگی قابل توجه است. این با این واقعیت توضیح داده می شود که یون های مختلف به طور متفاوتی جذب می شوند: برخی قوی تر و برخی دیگر ضعیف تر هستند. سرعت حرکت آنها از طریق جاذب به این بستگی دارد. اگر کاتیونهای موجود در مخلوط مورد تجزیه و تحلیل را به ترتیب کاهش ظرفیت جذب آنها ترتیب دهیم، سری زیر بدست می آید:

Fe3+ → Cu2+ → Co2+

https://pandia.ru/text/78/355/images/image013_19.jpg" align="left" width="144" height="162 src=">در آزمایشگاه ها به جای پوسته تخم مرغ، بشقاب های مخصوص شیشه ای و آلومینیوم یا پلاستیک استفاده می شود که ابتدا یک لایه نازک جاذب روی آنها اعمال می شود که به همین دلیل به این کروماتوگرافی می گویند. لایه ی نازک.این روش کروماتوگرافی توسط یک دانشمند شوروی در سال 1938 پیشنهاد شد.

https://pandia.ru/text/78/355/images/image015_17.jpg" align="left hspace=12" width="181" height="175">

https://pandia.ru/text/78/355/images/image017_11.jpg" align="left" width="158" height="158 src=">.jpg" align="left" width="154 " height="163 src=">

تجربه "جداسازی لکه ها از قلم نمدی روی کاغذ"

ما به یک دایره کاغذ صافی نیاز داریم. در مرکز دایره، با یک خودکار مشکی، یک نقطه پررنگ ایجاد کنید (می توانید از همان قلم نمدی مانند آزمایش خانه قبلی استفاده کنید). بیایید از یک فنجان با دایره کاغذی روی آن استفاده کنیم. با استفاده از پیپت، قطرات آب را به مرکز لکه بریزید.

https://pandia.ru/text/78/355/images/image021_8.jpg" align="left" width="226" height="246 src=">کار عملی" href="/text/category/prakticheskie_raboti //" rel="bookmark">کار عملی با روش های مختلف انجام کروماتوگرافی آشنا شدم

کروماتوگرافی روشی برای جداسازی مخلوط ها بر اساس سرعت های مختلف حرکت مولکول های مواد مختلف در محیط های مختلف است. بنابراین، مولکول ها در اینجا جدا می شوند. برای بشریت، این روش به ما اجازه داد تا یک جهش کیفی به جلو داشته باشیم، مسیرهای جدیدی را در علم ایجاد کنیم، تحقیقات جدید انجام دهیم، اکتشافات مهم را انجام دهیم، افراد همفکر را متحد کنیم تا روی هر مشکل کار کنند.

ادبیات

1. "شیمی. دوره مقدماتی. کلاس هفتم » مسکو. Bustard.2009;

2. . . "علم شیمی. کتاب کار کلاس هفتم" مسکو بوستارد. 2009.

3. کروماتوگرافی یک راه ساده برای تجزیه و تحلیل مواد پیچیده است (علم و زندگی. شماره 2، 1998)

4. مطالعه کروماتوگرافی در یک درس انتخابی ( شیمی در مدرسه شماره 5، 2012)

پشتیبانی اطلاعات و منابع اینترنتی

1.http://adalin. *****/l_01_00/l_01_10d. shtml

2. http://www. *****/art/ch-act/0325.php

3. http://*****/articles/565314/

4. http:///?p=94

5.عکس از آرشیو شخصی

روش کروماتوگرافی کاغذیبه کروماتوگرافی سطحی اشاره دارد، بر اساس توزیع آنالیت ها بین دو مایع غیرقابل اختلاط است.

در کروماتوگرافی پارتیشن، جداسازی مواد به دلیل تفاوت در ضرایب توزیع اجزاء بین دو مایع غیرقابل اختلاط اتفاق می افتد. این ماده در هر دو فاز به صورت محلول وجود دارد. فاز ساکن در منافذ کاغذ کروماتوگرافی بدون برهمکنش با آن باقی می ماند؛ کاغذ به عنوان حامل فاز ساکن عمل می کند.

انواع کاغذ کروماتوگرافی:

1) کاغذ آبدوست تا 22 درصد آب را در منافذ خود نگه می دارد. فاز ثابت - آب، فاز متحرک - حلال آلی. از چنین کاغذهایی برای تعیین مواد محلول در آب استفاده می شود.

2) کاغذ آبگریز آب را دفع می کند، بنابراین با یک حلال آلی غیر قطبی (فاز ثابت) آغشته می شود. فاز متحرک - آب؛ این مقاله برای تعیین ترکیبات نامحلول در آب (اسیدهای محلول در چربی، ویتامین ها) استفاده می شود.

الزامات زیر برای کاغذ کروماتوگرافی اعمال می شود:

¨ خلوص شیمیایی؛

¨ بی طرفی شیمیایی و جذب در رابطه با مواد تجزیه و تحلیل شده و فاز متحرک.

¨ یکنواختی در چگالی؛

¨ جهت الیاف یکسان.

برای به دست آوردن کروماتوگرام، یک قطره از مخلوط مورد تجزیه و تحلیل روی کاغذ قرار می گیرد. کاغذ در محفظه کروماتوگرافی قرار می گیرد، انتهای آن در ظرفی با ماده شوینده غوطه ور می شود. حلال در طول کاغذ حرکت می کند، مخلوط آنالیت ها بین فاز متحرک و ثابت توزیع شده و به صورت لکه یا راه راه روی کاغذ جدا می شود. موقعیت مناطق جزء با توسعه کاغذ کروماتوگرافی با معرف های مناسب تعیین می شود که ترکیبات رنگی را با اجزای مخلوط جدا شده تشکیل می دهند.

برای تعیین کمیت توانایی جداسازی مواد در یک سیستم کروماتوگرافی، از ضریب توزیع Kp استفاده می شود - نسبت غلظت یک ماده در فاز ثابت و متحرک. تعیین تجربی ضرایب توزیع در این روش غیرممکن است؛ برای ارزیابی توانایی جداسازی مواد روی کاغذ، از ضریب جابجایی (تحرک) Rf استفاده می شود. ضریب جابجایی برابر است با نسبت سرعت حرکت ماده () به سرعت حرکت فاز متحرک (). به طور تجربی، مقدار Rf به عنوان نسبت فاصله X پیموده شده توسط ماده به مسافت Xf که حلال از ابتدا تا خط مقدم طی کرده است، یافت می شود:

.

ضریب Rf در محدوده 0 تا 1.00 تغییر می کند. مقدار Rf به ماهیت ماده تعیین شده، نوع کاغذ کروماتوگرافی، کیفیت و ماهیت حلال، روش استفاده از نمونه، تکنیک آزمایشی و دما بستگی دارد. ضریب Rf به غلظت آنالیت و وجود اجزای دیگر بستگی ندارد.

شناساییکروماتوگرام به روش های زیر انجام می شود:

¨ مقایسه بصری رنگ مشخصه مناطق مواد در کروماتوگرام های مورد مطالعه و استاندارد.

¨ اندازه گیری ضرایب تحرک Rf برای استاندارد و آنالیت در یک حلال خاص. کروماتوگرافی و تعیین Rf برای مخلوط های آزمایشی و استاندارد بر روی همان کاغذ و در یک محفظه در شرایط کاملاً یکسان انجام می شود. با مقایسه ضرایب Rf، نتیجه‌گیری در مورد وجود اجزای خاص در مخلوط تجزیه‌وتحلیل شده حاصل می‌شود.

کمی سازیمستقیماً از کروماتوگرام یا با شستشو (شستشوی) آنالیت از کاغذ انجام می شود.

روشهای تحلیل کمی:

¨ مقایسه بصری شدت رنگ نقاط روی آزمایش و کروماتوگرام های استاندارد (تعیین نیمه کمی، دقت 15-20٪).

¨ اندازه گیری مساحت نقطه تشکیل شده توسط یک جزء معین و یافتن غلظت ماده با استفاده از نمودار کالیبراسیون ساخته شده برای یک سری محلول استاندارد در مختصات: ناحیه نقطه - غلظت ماده. دقت تعیین 5 – 10%؛

¨ شستشوی آنالیت از سطح کروماتوگرام و اندازه گیری اسپکتروفتومتری یا فلورمتری چگالی نوری مایع خروجی (A). غلظت یک ماده در محلول با استفاده از فرمول محاسبه می شود:

که در آن K ضریب تناسب است. S – مساحت نقطه، قبلا اندازه گیری شده، میلی متر 2; دقت تعیین 1%.

بر اساس روش کروماتوگرافی، کروماتوگرافی صعودی (شکل 21)، نزولی (شکل 22)، دایره ای (شکل 23)، گرادیان و کروماتوگرافی دو بعدی وجود دارد.

روش کروماتوگرافی کاغذی به طور گسترده برای تعیین ترکیبات معدنی، اسیدهای آمینه، آمین ها، پروتئین ها، کربوهیدرات ها، اسیدهای چرب، فنل ها، ویتامین ها در صنایع شیمیایی، غذایی، دارویی، پزشکی و بیوشیمی استفاده می شود.

این روش در تجزیه و تحلیل تقریباً همه محصولات غذایی کاربرد پیدا کرده است: در تولید شکر - برای تعیین کربوهیدرات ها. در شیرینی پزی و شیرینی پزی - اسیدهای آمینه، اسیدهای آلی، کربوهیدرات ها، پلی ساکاریدها و ترکیبات کربونیل؛ در شراب سازی - اسیدهای آلی و اسیدهای آمینه؛ در تولید شیر و محصولات لبنی - اسیدهای آمینه؛ در صنعت فرآوری گوشت - فنل ها، اسیدهای چرب و فرار، اسیدهای آمینه و ترکیبات کربونیل.