محیط کشت میکروب های بی هوازیکیت آب گوشت کبد پپتون - Tarozzi (MPPB).جگر تازه یا یخ زده (ترجیحاً گاو) به قطعات کوچک بریده می شود ، با مقدار مساوی از آب لوله کشی پر می شود ، به مدت یک ساعت جوشانده می شود ، از طریق پشم پنبه فیلتر می شود و 3 قسمت آبگوشت مزوپاتامیا به 1 قسمت از عصاره بدست آمده اضافه می شود. مخلوط را در حال جوشیدن گرم می کنید ، نمک آشپزی شیمیایی خالص (1.25 گرم در هر 1 لیتر محیط) اضافه می شود و pH آن بین 7.6-7.8 تنظیم می شود ، پس از آن به مدت 15 دقیقه جوشانده و از طریق کاغذ یا فیلتر پنبه مرطوب فیلتر می شود. قطعات ریز خرد شده (1.5-2 گرم) جگر به آبگوشت فیلتر شده ، به میزان 100 گرم جگر در هر 1 لیتر آب گوشت اضافه می شود (کبد ابتدا از فیلم ها تمیز می شود و با آب شسته می شود). چندین قطعه از این قبیل در یک لوله آزمایش قرار می گیرند ، 7-10 میلی لیتر آبگوشت در یک ستون بلند ریخته می شود ، پارافین مایع یا روغن پارافین روی سطح آن لایه لایه می شود.

آبگوشت با قطعات جگر تحت فشار بیش از 0.1 مگاپاسکال استریل می شود vدر عرض 30 دقیقه به منظور حذف اکسیژن از لوله آزمایش، محیط را قبل از تلقیح به مدت 10 دقیقه می جوشانند و به سرعت با آب سرد می کنند.

آگار نیمه مایع برای بی هوازی ها... 0.25-0.75٪ آگارآگار و 1٪ گلوکز به BCH اضافه می شود. pH محیط 7.4 است. این ماده در لوله های آزمایش در ستون های بلند ریخته می شود. به مدت 3 تا 20 دقیقه با بخار جریانی کسری استریل کنید.

محیط کشت باکتری های اسید لاکتیکشیر (کامل).حرارت دهید تا جوش بیاید. آن را در یک فلاسک لوله ریخته و در محل سرد به مدت 10-20 ساعت قرار دهید تا کرم ته نشین شود. پس از این مدت ، قسمت شیر ​​گرفته از شیر از طریق شیر لوله در لوله های آزمایش ریخته می شود و با شاخه های پنبه ای بسته می شود. در 100 درجه سانتی گراد به مدت سه روز به مدت 20 دقیقه یا در دمای 112 درجه سانتی گراد یک بار به مدت 30 دقیقه استریل می شود.

شیر بدون چربی... برای به دست آوردن شیر بدون چربی ، شیر کامل جدا می شود و سپس به همان روشی که از شیر کامل استفاده می شود پیش می رود.

شیر هیدرولیز شده (به گفته بوگدانوف). 1 لیتر جوشانده مصرف کنید وشیر بدون چربی تا 45 درجه سانتیگراد سرد شده ، pH را روی 7.6-7.8 تنظیم کنید ، 0.5 گرم پودر پانکراتین (قبلاً در مقدار کمی آب گرم رقیق شده) یا 2-3 گرم لوزالمعده خرد شده و بعد از چند دقیقه 5 میلی لیتر کلروفرم اضافه کنید. به پس از آن ، بطری کاملاً تکان داده می شود ، محکم با درپوش چوب پنبه بسته می شود و در حرارت 40 درجه سانتی گراد به مدت 3 روز با تکان دادن روزانه مایع قرار می گیرد. پس از دوره مشخص شده ، به منظور حذف کلروفرم ، بطری باز می شود ، مایع فیلتر شده و 2-3 بار با آب لوله کشی رقیق می شود. pH محیط را به 7.0-7.2 رسانده و استریل کنید.

شیر آگار هیدرولیز شده 1.5-2 ag آگار به شیر هیدرولیز شده اضافه می شود ، ذوب می شود ، در لوله های آزمایش ریخته و تحت فشار بیش از 0.1 مگاپاسکال استریل می شود vدر عرض 15 دقیقه چوب اسید لاکتیک در این محیط به خوبی رشد می کند.

وی آگار... برای 100 میلی لیتر آب لوله کشی ، 7.5 گرم آگار بگیرید ، تا زمان حل شدن کامل بجوشانید ، آب را به حجم اولیه اضافه کنید (یعنی در حجمی برابر حجم آب تبخیر شده) ، 400 میلی لیتر آب پنیر شیر آماده شده اضافه کنید ، در معرض جریان قرار دهید. بخار را به مدت 30 دقیقه ، از طریق یک لایه پشم پنبه فیلتر کنید ، داخل لوله های آزمایش بریزید وتحت فشار 0.05 مگاپاسکال به مدت 30 دقیقه استریل می شود.

چهارشنبه کلم... 200 گرم کلم خرد شده (یا یونجه) در 100 میلی لیتر آب ریخته می شود و در یک قابلمه به مدت 10 دقیقه جوشانده می شود ، از طریق دو لایه گاز فشرده می شود. مایع حاصل فیلتر شده و 2 بار با آب لوله کشی رقیق می شود. 2٪ گلوکز و 1٪ پپتون اضافه کنید ، داخل لوله های آزمایش ریخته و سه مورد را تحت فشار بیش از حد 0.05 مگاپاسکال به مدت 15 دقیقه استریل کنید.

محیطی برای رشد مخمر اسموفیل... حدود 1 لیتر آب مقطر 200 گرم عسل گرم شده ، 1 گرم اسید بی فسفریک پتاسیم ، 0.5 گرم سولفات منیزیم ، 0.5 گرم تارتارات آمونیوم ، 0.1 گرم کلرید سدیم و 0.1 گرم کلرید پتاسیم اضافه می شود. همه اجزاء تحت فشار بیش از 0.1 مگاپاسکال به مدت 20 دقیقه مخلوط شده و استریل می شوند.

محیط رشد برای هالوفیل ها... از محیط معمول مزوپاتامیا با افزودن 10-15 تا 20-30 درصد کلرید سدیم استفاده کنید. علاوه بر این، در تهیه محیط های غذایی جامد، درصد آگار نیز افزایش می یابد. استریلیزاسیون تحت فشار بیش از حد 0.1 مگاپاسکال به مدت 20 دقیقه انجام می شود.

رسانه غنی سازی... چهارشنبه مولر. به 4.5 گرم گچ شیمیایی خالص که قبلاً با حرارت خشک استریل شده است، 90 میلی لیتر MPB اضافه کنید و تحت فشار بیش از حد 0.1 مگاپاسکال به مدت 20 دقیقه استریل کنید. آماده کنید: الف) محلول هیپوسولفیت (50 گرم هیپوسولفیت خالص کریستالی تا 100 میلی لیتر با آب مقطر ریخته می شود ، با بخار جاری به مدت 30 دقیقه استریل می شود) ؛ ب) محلول ید (20 گرم ید فلزی و 25 گرم یدید پتاسیم به 100 میلی لیتر با آب مقطر ریخته می شود). قبل از کاشت ، 10 میلی لیتر محلول هیپوسولفیت و 2 میلی لیتر محلول ید به طور استریل با گچ به آبگوشت اضافه می شود. با افزودن هر یک از مواد ، مخلوط را تکان دهید. در لوله های آزمایش یا فلاسک های استریل پخش کنید.

چهارشنبه کیلیان... قبل از استفاده ، 1 میلی لیتر محلول آبی (1: 1000) سبز درخشان استریل به 100 میلی لیتر MPB معمولی اضافه می شود.

هنگام تهیه محیط های مغذی ، نیاز به در نظر گرفتن نیاز میکروارگانیسم های کشت شده در مواد مغذی مختلف ضروری است. طبقه بندی های مختلفی از رسانه های فرهنگ وجود دارد.

طبقه بندی محیط های کشت بر اساس ترکیب:

1. محیط های ساده(MPB ، MPA ، ژلاتین ، آب پپتون). آب گوشت پپتون (BCH) اساس پروتئینی همه محیط ها است.

روش های مختلفی برای تهیه BCH وجود دارد:

الف) در آب گوشت با افزودن پپتون آماده ؛

ب) در هضم محصولات هیدرولیز مواد اولیه با استفاده از آنزیم ها.

گوشت-پپتون آگار (MPA) - با افزودن آگار-آگار (1.5-3٪) به MPB به دست می آید. اگر MPA به صورت مورب در سراسر لوله یا ویال توزیع شود ، یک کج آگار است. اگر محیط به صورت عمودی در لوله آزمایش با ارتفاع 5-7 سانتی متر توزیع شود ، در ستون آگار است. MPA، منجمد شده در ظروف پتری به شکل چوب - آگار بشقاب. اگر محیط دارای لایه عمودی 2-3 سانتی متر ارتفاع باشد و لایه مورب هم اندازه باشد ، یک آگار نیمه آستری است.

2. محیط های پیچیدهبر اساس مواد ساده با افزودنی های خاص (کربوهیدرات ، خون ، صفرا ، تخم مرغ ، آب پنیر ، شیر ، نمک ، عوامل رشد و غیره) تهیه می شود.

طبقه بندی رسانه های کشت بر اساس اجزای اولیه:

1. رسانه فرهنگ طبیعییک محصول طبیعی با منشا حیوانی یا گیاهی است.

شاید:

سبزیجات (محصولات اولیه - سویا ، نخود فرنگی ، سیب زمینی ، هویج و غیره).

حیوانات (محصولات اولیه - گوشت ، ماهی ، تخم مرغ ، شیر ، بافتهای حیوانی ، صفرا ، سرم خون و غیره).

مخلوط (MPA، محیط Lowenstein - Jensen، و غیره).

2. محیط های مصنوعیحاوی فرآورده های طبیعی فرآوری شده (آب گوشت ، گوارش) ، موادی که از این محصولات به دست می آید (عصاره پپتون ، مخمر و ذرت) و افزودنی های مختلف. این بزرگترین و متنوع ترین ترکیب متداول ترین گروه رسانه است. آنها طبق دستور العمل های خاصی از انواع تزریق یا جوشانده با منشاء حیوانی یا گیاهی با افزودن نمک های معدنی ، کربوهیدرات ها و مواد نیتروژنی تهیه می شوند.

3. رسانه های مصنوعی(با ترکیب شیمیایی شناخته شده) از ترکیبات شیمیایی خالص با غلظت دقیق (با افزودن کربوهیدرات ، نمک ، اسیدهای آمینه ، ویتامین ها و غیره) تشکیل شده است. بر اساس این محیط ها با افزودن محیط های طبیعی یا مصنوعی به آنها، محیط های نیمه مصنوعی به دست می آید.

طبقه بندی رسانه های فرهنگی بر اساس سازگاری:چهارشنبه ها هستند مایع(رسانه بدون آگار)، نیمه مایع(با آگار تا 1%)، متراکم(آگار - 1.5-2.5٪). رسانه های مایع بیشتر برای مطالعه ویژگی های فیزیولوژیکی و بیوشیمیایی میکروارگانیسم ها ، برای تجمع زیست توده و محصولات متابولیک استفاده می شوند. رسانه های نیمه مایع معمولاً برای ذخیره سازی فرهنگ ها، آنهایی که متراکم هستند - برای جداسازی میکروارگانیسم ها، مطالعه مورفولوژی کلنی ها، اهداف تشخیصی، حسابداری کمی، تعیین خواص آنتاگونیستی و غیره استفاده می شود.

طبقه بندی رسانه های فرهنگی بر اساس هدف:جهانی (مشترک) و خاص.

محیط های جهانی (پایه).این رسانه ها برای پرورش اکثر میکروارگانیسم های نسبتاً بی تکلف استفاده می شوند یا به عنوان پایه ای برای تهیه محیط های ویژه، افزودن خون، قند، شیر، آب پنیر و سایر مواد لازم برای تولید مثل یک یا نوع دیگری از میکروارگانیسم ها استفاده می شوند. این گروه شامل: MPB - آب گوشت -پپتون ، MPA - گوشت -پپتون آگار ، MPG - ژلاتین گوشت -پپتون و غیره است.

محیط های خاصطراحی شده برای جداسازی و کشت انتخابی انواع خاصی از میکروارگانیسم ها که در محیط های ساده رشد نمی کنند.

انواع زیر رسانه های ویژه وجود دارد: رسانه غنی کننده ، انتخابی ، تشخیص افتراقی ، محیط حفاظتی و ذخیره سازی.

رسانه غنی سازیبسیاری از میکروارگانیسم ها در محیط معمولی رشد نمی کنند ، بنابراین کربوهیدرات ها (آب قند یا آگار) یا پروتئین ها (آگار آب پنیر و آبگوشت ، آگار خون و آبگوشت) به آن اضافه می شود تا ارزش غذایی محیط افزایش یابد. آگار خون یا آبغوره با افزودن 5 تا 10 درصد خون استریل دیفیبرینه شده استریل گرم شده از قوچ ، خرگوش ، اسب ، انسان به محیط تغذیه به دست می آید. این محیط برای جداسازی استرپتوکوک ها ، پنوموکوک ها و سایر باکتری ها و همچنین مطالعه فعالیت همولیتیک استفاده می شود. آب پنیر یا آب پنیر آگار با افزودن 15 تا 20 درصد سرم اسب یا گاو به محیط های ساده تهیه می شود.

2. محیط های انتخاباتی (انتخاباتی).این رسانه ها برای جداسازی و تجمع نوع خاصی از میکروارگانیسم ها از مواد حاوی چندین نوع میکروب طراحی شده اند. هنگام کاشت مواد حاوی مخلوطی از میکروارگانیسم های مختلف بر روی آنها ، ابتدا رشد گونه هایی که این محیط برای آنها انتخابی خواهد بود ظاهر می شود. انتخاب پذیری محیط با ایجاد شرایط مطلوب برای کشت برخی از میکروب ها (pH ، Eh ، غلظت نمک ، ترکیب مواد مغذی) به دست می آید. انتخاب مثبت یا با افزودن موادی به محیط که دیگر میکروارگانیسم ها را مهار می کند (صفرا ، غلظت بالای NaCl ، آنتی بیوتیک ها و غیره) ، به عنوان مثال. انتخاب منفی این گروه شامل:

محیط سلنیت- بهترین محیط غنی سازی برای میکروب های سالمونلا و اسهال خونی در Sonne است. سلنیت سدیم موجود در محیط ، رشد این باکتری ها را تحریک می کند و از رشد فلور همراه جلوگیری می کند.

بیسموت سولفیت آگار -حاوی نمک های بیسموت ، سبز درخشان است. سالمونلا در این محیط به عنوان کلونی سیاه رشد می کند. انواع دیگر باکتری ها روی این محیط رشد نمی کنند.

زرده نمک آگار (YSA) -محیط جداسازی استافیلوکوک ها ، حاوی 10٪ کلرید سدیم است که بیشتر باکتری های موجود در مواد را سرکوب می کند. علاوه بر این ، این محیط همچنین تشخیص افتراقی است ، زیرا وجود زرده تخم مرغ امکان تشخیص آنزیم لسیتیناز (لسیتوویتلاز) را ایجاد می کند ، که استافیلوکوک های بیماری زا را تشکیل می دهد. لسیتیناز، لسیتین را به فسفرکولین ها و اسیدهای چرب نامحلول در آب تجزیه می کند، بنابراین محیط اطراف کلنی های مثبت لسیتین کدر می شود و یک ناحیه اپالسنت به شکل "تاج رنگین کمانی" ظاهر می شود.

آبگوشت صفراویانتخابی برای سالمونلا، که تولید مثل آن با 10٪ صفرای اضافه شده تحریک می شود و در عین حال رشد میکروارگانیسم های همراه را مهار می کند.

آگار قلیایییا آب پپتون قلیاییآنها برای ویبرهای وبا انتخابی هستند ، واکنش قلیایی محیط (pH 9.0) مانع از رشد ویبریوهای وبا نمی شود ، بلکه مانع از رشد سایر میکروارگانیسم ها می شود. 3-5 روز اف

3. محیط های تشخیصی افتراقی.از رسانه های تشخیصی افتراقی برای تمایز یک نوع میکروارگانیسم از دیگری بر اساس ماهیت فعالیت آنزیمی آنها استفاده می شود. ترکیب این رسانه ها به گونه ای انتخاب شده است که مشخصه ترین ویژگی های نوع خاصی از میکروارگانیسم ها را بر اساس ویژگی های متابولیسم آن مشخص می کند.

رسانه برای تشخیص توانایی پروتئولیتیک و همولیتیک میکروب ها ، حاوی مواد پروتئینی: خون ، شیر ، ژلاتین و غیره متداول‌ترین رسانه‌ها عبارتند از: سرم اسب، شیر و آگار خون (CA)، ژلاتین گوشت-پپتون (MPG).

رسانه های مورد مطالعه برای بررسی خواص گلیکولیتیک شامل سه جزء اصلی هستند: یک پایه مغذی (آبگوشت ، آگار) ، یک بستر (مونو و دیساکارها ، الکلهای پلی هیدریک) و یک شاخص برای تشخیص آنزیم های مربوطه. تخریب آنزیمی بسترها منجر به تغییر pH و تغییر رنگ محیط می شود. رایج ترین رسانه های رنگی با کربوهیدراتهای مختلف (به عنوان مثال ، بروموتیمول آبی ، شاخص BP). رسانه های گیس نیز بسیار گسترده هستند ، که بر اساس آنها تفاوت در توانایی تخمیر کربوهیدرات های مختلف برای تشکیل اسید یا اسید و گاز در نظر گرفته می شود.

برای تمایز انتروباکتریها ، از آب پپتون با مجموعه ای از کربوهیدراتهای مختلف ، شاخص Andrede و شناورها استفاده می شود که تشخیص تشکیل گاز را تسهیل می کند و به تعیین بصری تغییر در مشخصه pH میکروارگانیسم های مختلف کمک می کند. به ویژه، جابجایی به سمت اسیدی باعث قرمز شدن محیط با معرف آندره یا زرد شدن محیط در هنگام استفاده از محیط با بروموتیمول آبی می شود، در حالی که هنگام قلیایی شدن، نشانگر آندره و آبی بروموتیمول رنگ محیط را تغییر نمی دهند. به عنوان مثال، برای جداسازی باکتری های بیماری زا از روده، از رسانه هایی استفاده می شود که تمایز میکروارگانیسم های بیماری زا را از ساکنان دائمی روده - میکروارگانیسم هایی که لاکتوز را تجزیه می کنند، ممکن می سازد.

این محیط ، محیط اندو است. اجزای اصلی محیط اندو MPA، لاکتوز و فوشسین بازی هستند که با سولفیت سدیم تغییر رنگ داده اند. محیط کشت اصلی صورتی روشن است. در طی تخمیر لاکتوز، استالدهید تشکیل می شود که با سولفیت واکنش می دهد و در طی این فرآیند آزاد می شود، فوشین کلنی ها را به رنگ قرمز روشن رنگ می کند. بنابراین، اشریشیا کلی که لاکتوز را تخمیر می کند، هنگام رشد در این محیط، کلنی های قرمز رنگ با درخشندگی فلزی تشکیل می دهد و سالمونلا و شیگلا بی رنگ هستند، زیرا لاکتوز را تخمیر نمی کنند.

4. محیط تجمع ،که در آن رشد سریع انواع خاصی از میکروارگانیسم ها وجود دارد.

5. رسانه های محافظه کار (حمل و نقل).طراحی شده برای حفظ میکروارگانیسم ها در حین انتقال به محل تحقیق. این محتویات حاوی مواد افزودنی هستند که از تکثیر و مرگ میکروب ها جلوگیری می کند ، که به حفظ زنده ماندن آنها کمک می کند. پرکاربردترین آنها مخلوط گلیسرول (محیط Teague) ، مخلوط بافر فسفات و Kari-Blair's ، Amies 'media (با و بدون کربن فعال) ، Stewart و غیره است.

عقیم سازی محیط های کشت.

همه محیط های کشت ، صرف نظر از هدف آنها ، در ظروف تمیز ریخته و استریل می شوند. اکثر رسانه ها با اتوکلاو استریل می شوند ، اما تحت شرایط مختلف ، بسته به ترکیب آنها.

1. محیط های مصنوعی و کلیه محیط های آگار که حاوی پروتئین و کربوهیدرات های بومی نیستند به مدت 20-15 دقیقه در اتوکلاو در دمای 115-120 درجه سانتی گراد و فشار 1-1.5 اتمسفر استریل می شوند.

2- محیط های حاوی کربوهیدرات و شیر (که حاوی لاکتوز است) ، ژلاتین مغذی با جریان بخار در دمای 100 درجه سانتی گراد به صورت کسری یا در اتوکلاو در دمای 112 درجه سانتی گراد و تحت فشار تا 1 اتمسفر استریل می شود.

3. محتویات حاوی مواد پروتئینی (سرم خون ، مایع آسیتیک) با تیندالیزاسیون یا فیلتراسیون ارائه می شود.

4- برای عقیم سازی محیط کشت حاوی پروتئین های بومی ، از فیلتراسیون از طریق فیلترهای غشایی سیتز استفاده می شود.

برای کنترل نازایی محیط پس از عقیم سازی ، آن را در ترموستات در دمای 37 درجه سانتی گراد به مدت 3-5 روز قرار می دهیم. محیط مایع باید شفاف باقی بماند و علائم رشد نباید در سطح و در ضخامت محیط های جامد مغذی ظاهر شود. علاوه بر کنترل نازایی ، کنترل شیمیایی محیط های آماده انجام می شود ، که شامل این واقعیت است که در چندین نمونه از هر سری pH ، مقدار نیتروژن کل و آمین و کلریدها تعیین می شود.

همچنین کنترل بیولوژیکی رسانه ها وجود دارد. در این حالت چند نمونه از محیط با کشت آزمایشگاهی میکروبی که محیط برای آن تهیه شده تلقیح شده و ماهیت رشد آن بررسی می شود. تنها پس از گذراندن کنترل رسانه ها می توان از آنها برای مقصود مورد نظر خود استفاده کرد.

محیط کشت اساس تحقیقات باکتریولوژیکی است. آنها به منظور جداسازی فرهنگهای خالص میکروبها از مواد مورد مطالعه و مطالعه خواص آنها عمل می کنند. در محیط های مغذی ، شرایط بهینه ای برای تولید مثل میکروارگانیسم ها ایجاد می شود. رسانه باید حاوی مواد لازم برای ساخت همه اجزای سیتوپلاسم باشد ، به عنوان مثال. همه منابع رشد یک موجود زنده اینها در درجه اول شامل منابع نیتروژن ، کربن ، هیدروژن و اکسیژن هستند.

منبع هیدروژن و اکسیژن در محیط های غذایی آب است. منبع نیتروژن ترکیبات آلی است که از گوشت ، ماهی ، جفت ، شیر ، تخم مرغ ، خون به دست می آید. در نتیجه هیدرولیز با پانکراتین یا تریپسین، به اصطلاح. هیدرولیزات حاوی مقدار زیادی آمینو اسید و پپتون است که توسط بسیاری از میکروارگانیسم ها به خوبی جذب می شود. پروتئین بومی تنها توسط برخی از میکروارگانیسم ها با اگزوپروتئازها جذب می شود. هیدرولیزها پایه ای برای تهیه محیط برای بسیاری از میکروارگانیسم ها هستند.

منبع کربن برای میکروب های بیماری زا عمدتاً کربوهیدرات های مختلف است: مونو و دی ساکاریدها، الکل های پلی هیدریک، اسیدهای آلی و نمک های آنها.

علاوه بر ارگانوژن ها، باکتری ها به ترکیبات معدنی حاوی فسفر، پتاسیم، گوگرد، سدیم، منیزیم، آهن و همچنین عناصر کمیاب مانند کبالت، ید، منگنز، بور، روی، مولیبدن، مس و غیره نیاز دارند.

نیاز میکروارگانیسم ها به ترکیبات معدنی با افزودن نمک های KH2PO4 ، K2HPO4 و ... به محیط تغذیه برطرف می شود.عناصر کمیاب که به عنوان کاتالیزور فرایندهای شیمیایی عمل می کنند به مقدار ناچیز مورد نیاز بوده و با پپتون ، نمک های معدنی و آب وارد محیط غذایی می شوند. همراه با عناصر آلی ذکر شده، بسیاری از میکروارگانیسم ها به فاکتورهای رشد نیاز دارند، به عنوان مثال. در موادی که خودشان نمی توانند سنتز کنند. عوامل رشد را باید به صورت آماده به محیط کشت اضافه کرد. فاکتورهای رشد شامل ویتامین‌های مختلفی است که منبع آن در محیط‌های غذایی فرآورده‌هایی با منشأ گیاهی و حیوانی اضافه شده به محیط غذایی حاوی اسیدهای نیکوتین، پانتوتنیک، پارابنزوئیک، ویتامین‌های A، B، C و غیره است.

میکروب ها می توانند مواد مغذی را تنها با واکنش خاصی از محیط جذب کنند ، زیرا نفوذپذیری غشاهای سلول های میکروبی بسته به PH محیط تغییر می کند.

الزامات رسانه فرهنگ

1. محیط کشت باید حاوی مواد مغذی لازم برای تغذیه میکروبی باشد.

2. پاسخ pH مناسبی برای نوع میکروب در حال رشد داشته باشید. -

3. محیط کشت باید دارای رطوبت و ویسکوزیته کافی باشد ، زیرا میکروب ها طبق قوانین انتشار و اسمز غذا می خورند.

4- دارای ایزوتونیکی بوده و پتانسیل اکسیداسیون و کاهش کمی (rH2) دارد.

5. رسانه فرهنگ باید عقیم باشد ، بنابراین امکان رشد فرهنگهای خالص را تضمین می کند.

نیاز به مواد مغذی و شرایط فیزیکی برای انواع مختلف میکروب ها یکسان نیست و این امر امکان ایجاد یک محیط تغذیه ای جهانی را حذف می کند.

از نظر قوام، محیط های مغذی متراکم و مایع وجود دارد. تراکم بر اساس مایع با افزودن چسب به آنها تهیه می شود: آگار آگار یا ژلاتین! آگار آگار (به زبان مالایی - ژله) یک محصول گیاهی است که از جلبک دریایی استخراج می شود. آگار آگار در دمای 80-86 درجه سانتیگراد در آب حل می شود، در دمای 40-36 جامد می شود و بنابراین برای فشرده سازی محیط های غذایی برای رشد گروه های مختلف میکروارگانیسم ها در دمای بهینه آنها استفاده می شود.

طبقه بندی رسانه های فرهنگی با توجه به ترکیب و هدف آنها انجام می شود.

1. از نظر ترکیب، محیط های کشت به ساده و پیچیده تقسیم می شوند.

گروهی از محیط های همه منظوره را متمایز کنید - ساده. این گروه شامل براث گوشت پپتون (آبگوشت مغذی ساده)، گوشت پپتون آگار (آگار مغذی ساده)، ژلاتین مغذی است. از این رسانه ها برای رشد بسیاری از میکروبهای بیماریزا استفاده می شود. محیطهای عمومی یا محیط کشت ساده معمولاً از هیدرولیزات با افزودن پپتون و کلرید سدیم تهیه می شوند. آنها همچنین به عنوان پایه ای برای تهیه رسانه های دشوار استفاده می شوند.

2. گروه دوم شامل محیط های تشخیصی انتخابی ، ویژه و افتراقی است.

رسانه های انتخابی (انتخابی ، انتخابی ، انباشت ، غنی سازی). اصل ایجاد محیط های غذایی انتخابی بر اساس ارضای نیازهای اولیه بیوشیمیایی و انرژی نوع میکروبی است که برای کشت آن در نظر گرفته شده است، یا بر اساس افزودن بازدارنده هایی که رشد میکرو فلور همراه را سرکوب می کنند. ترکیب و غلظت خاصی از مواد مغذی ، عناصر کمیاب ، عوامل رشد با مقدار pH دقیقاً مشخص شده یا افزودن بازدارنده ها شرایط مطلوبی را برای رشد یک یا چند نوع میکروارگانیسم فراهم می کند. هنگام کاشت مواد حاوی مخلوطی از میکروب های مختلف بر روی آنها ، ابتدا رشد گونه هایی که محیط برای آنها انتخابی است ، شروع به پژمرده شدن می کند. نمونه هایی از محیط های انتخابی عبارتند از: آبگوشت زرده، آبگوشت سلنیت، محیط پلوسکیرو برای رشد میکروب های روده، آب پپتون قلیایی برای ویبریو وبا.

آبگوشت زرده. 10 تا 20 درصد صفراوی گاو به BCH اضافه می شود. صفرا رشد کوکا و فلور هوایی را مهار می کند ، اما برای تولید مثل سالمونلا مطلوب است.

آبگوشت سلنیت. شامل آبگوشت فسفات با افزودن نمک سدیم سلنیت است که یک مهارکننده رشد فلور کوکال، اشریشیا کلی است، اما رشد سالمونلا را مهار نمی کند.

چهارشنبه پلوسکیرف. محیط متراکم حاوی مهار کننده های اشرشیاکلی ، کوکا ، اما برای رشد شیگلا و سالمونلا مطلوب است ، که تولید مثل آن با نمک های سبز و صفراوی درخشان مهار نمی شود.

آب پپتون. حاوی 1٪ پپتون و 0.5٪ کلرید سدیم است. محیط انتخابی برای ویبرهای کلر است ، زیرا آنها در "محیط های گرسنه" ، به ویژه با واکنش قلیایی ، بهتر از سایر باکتری ها تولید مثل می کنند ، زیرا خودشان مواد زائد اسیدی ترشح می کنند.

محیط های خاص لازم برای کشت باکتری هایی که روی محیط های ساده مغذی رشد نمی کنند. برای برخی ارگانیسم ها، اضافه کردن کربوهیدرات، خون و سایر مواد مغذی اضافی به محیط های غذایی ساده ضروری است. نمونه هایی از محیط کشت ساده ، آب قند و شکر آگار برای استرپتوکوک (به ترتیب از MPB و MPA تهیه شده است ، که به آنها 0.5 تا 2 درصد گلوکز اضافه می شود).

برای پنوموکوک ها و مننژوکوک ها ، آب پنیر و سرم آگار یک رسانه مخصوص هستند (برای تهیه آب پنیر ، 1 قسمت MPB را با 2 قسمت سرم تازه مخلوط کنید ، برای به دست آوردن سرم آگار ، 10 تا 25 درصد سرم استریل اسب یا گاوی به شیر اضافه می شود. MPA ذوب شده).

از رسانه های تشخیصی افتراقی برای تعیین گونه های میکروب مورد مطالعه ، بر اساس ویژگی های متابولیسم آن استفاده می شود. " با توجه به هدف آنها ، محیط های تشخیصی متمایز به شرح زیر تقسیم می شوند:

1. رسانه برای تشخیص توانایی پروتئولیتیک میکروب ها ، حاوی شیر ، ژلاتین ، خون و غیره.

2. محیط با کربوهیدرات و الکلهای پلی هیدریک برای

تشخیص انواع آنزیمهای ساکارولیتیک

شاخص های زیر در ترکیب رسانه های تشخیصی افتراقی که برای شناسایی خواص ساکارولیتیک و آنزیم های ردوکس طراحی شده اند ، معرفی می شوند: قرمز خنثی ، فوکسین اسیدی ، بروموتیمول آبی ، آبی آبی با اسید صورتی (BP). با تغییر رنگ آن در مقادیر مختلف pH ، نشانگر وجود آنزیم و تخریب ماده وارد شده به محیط است.

نمونه هایی از محیط های تشخیص افتراقی:

چهارشنبه اندو. شامل MPA با افزودن 1% لاکتوز و فوشین بازی بی رنگ شده با سولفیت سدیم (شاخص). اندو مدی کمی رنگ صورتی دارد. در تشخیص عفونت های روده ای برای تمایز باکتری هایی که لاکتوز را تجزیه می کنند و محصولات اسیدی تشکیل می دهند از باکتری هایی که این توانایی را ندارند استفاده می شود. کلنی های میکروب های لاکتوز مثبت (اشریشیا کلی) به دلیل کاهش فوشسین قرمز هستند. مستعمرات میکروارگانیسم های منفی لاکتوز - سالمونلا ، شیگلا و دیگران - بی رنگ هستند.

محیط های تشخیص افتراقی شامل یک ردیف گوناگون کوتاه و گسترده است. این شامل محیط هایی با کربوهیدرات (Giss media)، MPB، شیر، ژلاتین مزوپاتامیا است.

محیط Giss بر اساس آب پپتون تهیه می شود که به آن مونو، دی یا پلی ساکاریدهای خالص شیمیایی (گلوکز، لاکتوز، نشاسته و غیره) اضافه می شود.

یک نشانگر به رسانه اضافه می شود تا تغییرات pH در نتیجه تشکیل اسید و تجزیه کربوهیدرات را تشخیص دهد. با تجزیه عمیق تر کربوهیدرات ها، محصولات گازی (CO2، CH4، و غیره) تشکیل می شوند که با استفاده از شناورها - لوله های آزمایش کوچک، به طور وارونه در محیط پایین می آیند. محیط های حاوی کربوهیدرات را می توان به صورت متراکم - با افزودن 0.5-1٪ آگار-آگار - تهیه کرد. سپس گازها با تشکیل حباب (پارگی) در ستون محیط جذب می شوند.

در MPB ، که بخشی از ردیف رنگارنگ است ، محصولاتی یافت می شود که در حین تجزیه اسیدهای آمینه و پپتون ها (ایندول ، سولفید هیدروژن) ایجاد می شوند. سولفید هیدروژن با قرار دادن یک نوار کاغذ صافی خیس شده در محلول استات سرب در BCH پس از تلقیح کشت شناسایی می شود. وقتی اسیدهای آمینه حاوی گوگرد تقسیم می شوند ، سولفید هیدروژن آزاد می شود ، به دلیل تشکیل سولفید سرب ، تکه کاغذ سیاه می شود. برای تعیین ایندول می توان از یک شاخص پیچیده استفاده کرد. ایندول از تجزیه تریپتوفان تشکیل می شود و زمانی که این شاخص به کشت رشد یافته روی BCH اضافه شود، قابل تشخیص است. در حضور ایندول ، MPB سبز یا آبی می شود.

محیط های خشک

آگار مغذی و همچنین رسانه های تشخیصی افتراقی اصلی ، در حال حاضر به شکل آماده سازی خشک حاوی تمام اجزای لازم تولید می شوند. به چنین پودرهایی فقط باید آب اضافه کنید و بپزید و بعد از ریختن آن را استریل کنید.

مواد مغذی ویژه (انتخابی).

رسانه رشد مخمر

رسانه مصنوعی Reader

ترکیب محیط شامل ، g / l: سولفات آمونیوم 3 ، سولفات منیزیم 0.7 ، نیترات کلسیم 0.04 ، کلرید سدیم 0.5 ، پتاسیم دی هیدروژن فسفات 1.0 ، پتاسیم هیدروژن فسفات 0.1 است. pH اولیه 6.6 نیترات کلسیم، که توسط مخمر استفاده نمی شود، می تواند از محیط حذف شود. برای مطالعه تولید مثل مخمر 2 sugar شکر ، برای مطالعه تخمیر - 5-10 add اضافه کنید. محیط مصنوعی کامل حاوی ویتامینهای کریستالی ، میکروگرم بر میلی لیتر است: اینوزیتول 5 ، بیوتین 0.0001 ، اسید پانتوتنیک 0.25 ، تیامین 1.0 ، پیریدوکسین 0.25 ، اسید نیکوتینیک 0.5. محیط در اتوکلاو با فشار 0.1 M Pa به مدت 20 دقیقه استریل می شود.

محیط گلوکز-آمونیوم

حاوی مواد زیر در 1 لیتر آب لوله کشی عبارتند از: سولفات آمونیوم 5، پتاسیم دی هیدروژن فسفات 0.85، پتاسیم هیدروژن فسفات 0.15، سولفات منیزیم 0.5، کلرید سدیم 0.1، کلرید کلسیم 20، کلرید کلسیم 0. مخمر (0.2)) یا عصاره گوشت (0.3)) و آب انگور را اضافه کنید.

محیط مصنوعی برای تشخیص مخمرهای ناقص

حاوی 1 لیتر آب لوله کشی مواد زیر ، g / l: گلوکز 50 ، لیزین 3 ، پتاسیم دی هیدروژن فسفات 1 ، سولفات منیزیم 1 ، سولفات آهن - آثار. هر جزء به طور جداگانه در آب حل شده و به ترتیب نشان داده شده اضافه می شود. آگار (1.5٪) به محیط اضافه می شود ، ذوب می شود ، در لوله های آزمایش ریخته و به مدت 20 دقیقه با فشار 0.05 مگاپاسکال استریل می شود.

محیط لیزین کامل برای تشخیص مخمرهای ناقص

حاوی مواد زیر در 1 لیتر آب لوله کشی، گرم در لیتر: گلوکز 50، سولفات منیزیم 1، پتاسیم دی هیدروژن فسفات 2، پتاسیم لاکتات 12 میلی لیتر (محلول 50%)، /، (+) لیزین مونوهیدرات 1، محلول ویتامین (در هر) 100 میلی لیتر آب مقطر استریل اضافه می شود ، g: اینوزیتول 2 ، کلسیم پانتوتنات 0.4 ، نیکوتین آمید 0.5 ، هیدراتتیامین 0.1 ، آگار 20 ؛ pH محیط - 5-5.2. محیط در لوله های آزمایش 15 میلی لیتر ریخته می شود و به مدت 15 دقیقه استریل می شود در فشار 0.1 مگاپاسکال

داروی استات برای تشخیص مخمر ناقص

برای 1 لیتر آب شیر ، 10 گرم استات سدیم ، 10 گرم کلرید آمونیوم ، 5 گرم گلوکز ، 3 میلی لیتر اتولیزات مخمر ، در لوله های آزمایش 5 میلی لیتر ریخته و با فشار 0.05 مگاپاسکال به مدت 30 دقیقه استریل کنید.

محیطی برای تشخیص مخمرهای خارجی از نظر مورفولوژیکی شبیه به فرهنگ اصلی

10 گرم پپتون، 2 گرم هیدروژن فسفات پتاسیم در 500 میلی لیتر آب مقطر حل شده، فیلتر می شود. در تصفیه ، 15 گرم آگار ذوب می شود ، 10 گرم گلوکز ، 0.4 گرم ائوزین و 0.065 میلی لیتر متیلن بلو (محلول الکل 90٪) ذوب می شود ، با آب مقطر داغ به 1000 میلی لیتر می رسد ، در لوله های آزمایش ریخته و استریل می شود. به مدت 15 دقیقه با فشار 0 ، 1 مگاپاسکال. هنگامی که عقیم می شود ، رنگ از بین می رود و وقتی سرد می شود ، دوباره ظاهر می شود. محیط را بیش از 2 ماه ذخیره نکنید.

محیطی برای تشکیل پسودومایسلیوم

گلوکز-پپتون آگار.به 1 لیتر آب شیر اضافه کنید ، g: پپتون 10 ، گلوکز 20 ، آگار 30-35. به مدت 30 دقیقه در فشار 0.05 مگاپاسکال استریل می شود. در صورت لزوم ، می توانید مخمر یا عصاره گوشت (0.5) اضافه کنید یا به صورت مایع بپزید.

سیب زمینی آگار. 100 گرم سیب زمینی پوست کنده ، شسته و نازک بریده شده در محل خنک به مدت چند ساعت با 300 میلی لیتر آب لوله کشی تزریق می شود. عصاره فیلتر می شود ، 230 میلی لیتر عصاره با 1 لیتر آب شیر آورده می شود ، 20 گرم گلوکز ، 30-35 گرم آگار اضافه می شود ، ذوب شده و به مدت 1 ساعت با فشار 0.075 مگاپاسکال ذوب می شود.

مخمر آب با کربوهیدرات ("ردیف رنگ")

توانایی مخمر برای ایجاد تخمیر کربوهیدرات ها با استفاده از آب مخمر با 2 درصد قند آزمایش شده (گلوکز ، مالتوز ، ساکاروز ، لاکتوز ، رافینوز و غیره) تعیین می شود. این ماده در لوله های آزمایش با شناور ، لوله های دانبار ریخته می شود و با بخار جریانی کسری استریل می شود. محاسبه نتایج پس از کاشت پس از 2 روز ، در صورت لزوم ، پس از 7 روز کشت در دمای 30 درجه سانتی گراد انجام می شود.

توانایی مخمر برای جذب کربوهیدراتها با اکسیداسیون بر روی محیطی با ترکیب زیر ، r / l: سولفات آمونیوم 5 ، پتاسیم دی هیدروژن فسفات 1 ، سولفات منیزیم 0.5 ، اتولیلیت 1 ، قند آزمایش 10 ، آگار 20 مورد بررسی قرار می گیرد. در لوله های آزمایش ، به مدت 30 دقیقه با فشار 0.05 مگاپاسکال استریل می شود ، شیب آگار آماده می شود. رشد فرهنگها پس از 3-4 روز ارزیابی می شود.

قند مخمر آگار

0.5٪ کلرید سدیم، 1٪ گلوکز (یا 4 یا 10٪ ساکارز) و 2٪ آگار، PH 6.8 (با گلوکز) و 6-6.5 (با ساکارز) در مخمر آب حل می شوند. محیط در لوله های آزمایش یا فلاسک ریخته می شود و با فشار 0.05 مگاپاسکال به مدت 30 دقیقه استریل می شود.

رسانه های آنتی بیوتیکی

برای توسعه ترجیحی مخمر و سرکوب باکتری های مرتبط ، آنتی بیوتیک های وسیع الطیف به رسانه ها معرفی می شوند: استرپتومایسین (100 U / ml) ، پنی سیلین (20-100 U / ml) ، لوومایسین (50 میلی گرم در لیتر) ، نئومایسین ( 20 U/ml) و غیره را می توان هم با هم و هم به صورت جداگانه به محیط اضافه کرد.

رسانه برای تشکیل آسکوسپور

چهارشنبه گورودکووی.حاوی 1 لیتر آب لوله کشی ، گرم: پپتون 10 ، کلرید سدیم 5 ، گلوکز 1 (یا 2.5) ، آگار 20 ؛ pH محیط 7.3. داخل لوله های آزمایش ریخته و به مدت 15 دقیقه با فشار 0.1 مگاپاسکال استریل می شود.

مک کلاری استات آگار.به 1 لیتر آب مقطر اضافه کنید: g: استات سدیم 8.2 ، کلرید پتاسیم 1.8 ، گلوکز 1 ، عصاره مخمر 2.5 ، آگار 15. اتوکلاو به مدت 15 دقیقه با فشار 0.1 مگاپاسکال.

چهارشنبه Starkey.در 1 لیتر آب شیر حل می شود ، g: پتاسیم هیدروژن فسفات 1 ، پتاسیم دی هیدروژن فسفات 0.25 ، سولفات منیزیم 0.25 ، کلرید کلسیم 0.05 ، آگار 20. با فشار 0.05 مگاپاسکال به مدت 15 دقیقه استریل می شود.

محیطی برای رشد مخمر اسموفیل

برای 1 لیتر شربت گلوکز (50-60٪ DM) 5 گرم پپتون و 20 گرم آگار اضافه کنید. می توان پپتون را با آب مخمر (50 میلی لیتر) جایگزین کرد. استریل در فشار 0.05 مگاپاسکال.

ملاس مخمر

200-300 گرم ملاس غلیظ را به نسبت 1: 3 با آب مخلوط کرده و تا دمای 95 درجه سانتیگراد حرارت داده و به مدت 2 ساعت می گذارند تا ته نشین شود و در همان زمان کلوئیدهای منعقد شده ته نشین شده و محلول ملاس شفاف می شود. 3٪ دی آمونیوم فسفات به محلول اضافه شده ، با آب تا 5-8٪ DM رقیق شده و در لوله های آزمایش یا فلاسک ها ریخته می شود. برای تهیه محیط آگار ، 1.5-2 ag آگار اضافه می شود. با فشار 0.05 مگاپاسکال به مدت 30 دقیقه در اتوکلاو یا کسری به مدت 1 ساعت با فاصله 20-24 ساعت 3 بار استریل می شود.

محیط کشت برای قارچ های رشته ای

چغندر آگار

چغندر قند که خوب شسته شده را به برش داده، با آب لوله کشی پر می کنند (20 گرم چغندر در هر 1 لیتر آب) و به مدت 30 دقیقه می جوشانند. فیلتر با آب به حجم اولیه آورده می شود، آگار 2% اضافه می شود و با فشار 0.1 مگاپاسکال به مدت 30 دقیقه استریل می شود.

تفاله چغندر

چغندرهای تمیز بر روی یک رنده خرد می شوند ، در ظروف پتری قرار می گیرند و بدون چرخاندن ، با فشار 0.1 مگاپاسکال به مدت 30 دقیقه استریل می شوند.

چهارشنبه چاپک

ترکیب محیط ، g / l: ساکارز یا گلوکز 30 ، پتاسیم دی هیدروژن فسفات 1.0 ، نیترات سدیم 2.0 ، سولفات منیزیم 0.5 ، کلرید پتاسیم 0.05 ، سولفات آهن 0.1 ، آگار 20. آگار شسته شده و به مواد مشخص شده اضافه می شود ، حل شده در 1 لیتر آب مقطر، گرم شده با بخار جریان، pH را با محلول 10٪ اسید سیتریک یا هیدروکسید سدیم روی 4.0-5.5 تنظیم کنید. فیلتر شده ، درون لوله های آزمایش ریخته و با بخار جریانی کسری 3 بار به مدت 30 دقیقه و با فاصله 1 روز استریل می شود.

قند-نیترات آگار چاپک-دوکسا

انتخاب 1.برای 1 لیتر آب مقطر، گرم: 20 ساکارز، پتاسیم هیدروژن فسفات 0.5، سولفات منیزیم 0.5، کلرید سدیم 0.5، نیترات پتاسیم 1، سولفات آهن - آثار، کربنات کلسیم 2-20، آگار.

گزینه 2. برای 1 لیتر آب مقطر ، g / l: ساکارز 30 ، نیترات آمونیوم 2.5 ، پتاسیم دی هیدروژن فسفات 1 ، سولفات منیزیم 1 ، سولفات آهن 0.01 ، آگار 20.

محیط نشاسته گلوکز

همان ترکیبات نمکی موجود در ساکارز نیترات آگار Czapek، اما به جای ساکارز، 25 گرم نشاسته محلول و 5 گرم گلوکز مصرف می شود.

نشاسته آمونیاک آگار

ترکیب محیط ، g / l: نشاسته محلول 10 ، کربنات کلسیم 3 ، پتاسیم هیدروژن فسفات 1 ، سولفات منیزیم 1 ، کلرید سدیم 1 ، سولفات آمونیوم 1 ، آگار 20. به مدت 30 دقیقه با فشار 0.05 مگاپاسکال عقیم می شود.

چهارشنبه سابورو

به 100 میلی لیتر آب مخمر استریل، گرم: پپتون 5، گلوکز 4، آگار 1.8-2 اضافه کنید. به مدت 20 دقیقه با فشار 0.05 مگاپاسکال یا کسری عقیم می شود.

این محیط بر پایه مخمر آب است. برای تهیه آب مخمر ، 70-100 گرم مخمر فشرده تازه (7-10 گرم مخمر خشک) به مدت 20-30 دقیقه در 1 لیتر آب مقطر جوشانده می شود و به مدت 12 ساعت در استوانه بلند در سرما نگهداری می شود. آب ، 30 دقیقه بجوشانید ، فیلتر کنید ، pH را به مقدار مورد نیاز تنظیم کنید. محیط آماده شده به صورت جزئی به مدت 20 دقیقه 2-3 با فاصله زمانی 1 روز استریل می شود. به 100 میلی لیتر آب مخمر استریل 1٪ پپتون ، 2٪ آگار اضافه کنید ، پس از حل شدن آگار ، 4٪ گلوکز یا مالتوز را اضافه کنید ، فیلتر کنید ، داخل لوله های آزمایش بریزید و با فشار 0.05 مگاپاسکال به مدت 20 دقیقه استریل کنید.

چهارشنبه را می توان در آب معمولی 1٪ پپتون تهیه کرد.

محیط کشت برای باکتری های اسید لاکتیک

شیر هیدرولیز شده (به گفته بوگدانوف)

شیر معمولی یا بدون چربی (معکوس) (pH 7.6-7.8) به مدت 5 دقیقه می جوشانند، ظرف را کاملاً تکان داده و تا دمای 45 درجه سانتیگراد خنک می کنند و 0.5-1 گرم پانکراتین را به 1 لیتر، پس از 4-7 دقیقه اضافه می کنند. میلی لیتر کلروفرم اضافه می شود. در ترموستات به مدت 18-20 ساعت در دمای 40 درجه سانتی گراد قرار می گیرد. ابتدا پودر پانکراتین را در کمی آب گرم رقیق کنید. در اولین ساعات ، شیر چندین بار با درب باز هم زده می شود. شیر هیدرولیز شده از طریق فیلتر کاغذی فیلتر شده ، 2-3 بار با آب رقیق شده ، با pH 7.0-7.2 تنظیم شده و به مدت 15 دقیقه با فشار 0.1 مگاپاسکال یا 20 دقیقه با فشار 0.05 مگاپاسکال استریل می شود.

شیرآگار هیدرولیز شده

1.5-2.0٪ آگار به شیر هیدرولیز شده اضافه می شود. مخلوط را حرارت می دهند تا به جوش آید و تا زمانی که آگار کاملا حل شود نگه می دارد. محیط گرم از طریق یک فیلتر پنبه فیلتر شده ، در لوله های آزمایش یا فلاسک ها ریخته می شود و با فشار 0.1 مگاپاسکال به مدت 10-15 دقیقه استریل می شود.

شیر بدون چربی با نشانگر

شیر تازه بدون چربی گرم شده به جوش ، با تنتور لیکوس گرم به رنگ یاس بنفش رنگ می شود. با بخار جاری (3 بار به مدت 30 دقیقه با فاصله 1 روز) یا اتوکلاو به مدت 10 دقیقه با فشار 0.1 مگاپاسکال استریل کنید.

مخمر مالت با دانه

مخمر مالت تهیه می شود ، اما بدون جداسازی دانه ها (12-15 D DM). داخل لوله های آزمایش بریزید ، گچ استریل (2-4٪) اضافه کنید و با فشار 0.05 مگاپاسکال به مدت 30 دقیقه استریل کنید.

مخمر ساکارز آگار

برای شناسایی لاکتوباسیلوسو Leuconostocاز محیط تهیه شده بر اساس آب مخمر با افزودن 0.5٪ کلرید سدیم ، 10٪ ساکارز و 2٪ آگار استفاده کنید. pH محیط 6-6.5.

جوانه متوسط

25 گرم جوانه مالت (جو) را به مدت 10 دقیقه با 500 میلی لیتر آب می جوشانند و پس از سرد شدن در دمای 45-50 درجه سانتیگراد ، در یک کیسه کتانی فیلتر می شوند ، با پروتئین مرغ زده شده شفاف می شوند ، دوباره جوشانده و از طریق فیلتر می شوند. فیلتر کاغذی برای حذف پروتئین منعقد شده 1.5٪ پپتون ، 2٪ شکر ، 2٪ آگار به محلول اضافه شده و به مدت 30 دقیقه با فشار 0.05 مگاپاسکال استریل می شود.

چهارشنبه کلم

200 گرم کلم سفید خرد شده را در 1 لیتر آب ریخته ، 10 دقیقه جوشانده ، در دو لایه گاز فشرده می شود. مایع حاصل از فیلتر تا شده فیلتر شده، 2 بار رقیق شده و 2% گلوکز و 1% پپتون به آبگوشت اضافه می شود، در لوله های آزمایش ریخته می شود و با فشار 0.05 مگاپاسکال به مدت 15 دقیقه استریل می شود. برای به دست آوردن یک محیط متراکم، 2٪ آگار اضافه کنید.

چهارشنبه MRS (چهارشنبه دو مان)

ترکیب محیط شامل، گرم در لیتر: سولفات منگنز 0.05، سولفات منیزیم 0.2، پتاسیم هیدروژن فسفات 2، نیترات آمونیوم 2، استات سدیم 5، پپتون 10، عصاره مخمر Difco 5، عصاره گوشت 10، گلوکز 280. 1 میلی لیتر، pH 6-6.5. محیط به مدت 30 دقیقه 3 بار با فاصله 1 روز یا در اتوکلاو با فشار 0.05 مگاپاسکال به مدت 20 دقیقه فیلتر و استریل می شود. به صورت مایع، نیمه مایع و آگار برای زایمان استفاده می شود Leuconostocو لاکتوباسیلوس

رسانه MRS (اصلاح شده توسط A.A. Lantsier)

چهارشنبه МРС-1.در 200 میلی لیتر آب مقطر حل کنید، گرم: سولفات منگنز 0.05، سولفات منیزیم 0.2، سیستئین 0.2، پتاسیم هیدروژن فسفات 2، سیترات آمونیوم 2، استات سدیم 5، گلوکز 20، 10 میلی لیتر پپتون، 0.10 میلی‌لیتر حل شود. در مقدار کمی آب مقطر داغ) ، اتولیز مخمر (پیوست 2 را ببینید) 50 میلی لیتر ، عصاره کبد 100 میلی لیتر. حجم مایع را با آب مقطر به 500 میلی لیتر می رسانند و 500 میلی لیتر شیر بدون چربی بوگدانوف هیدرولیز شده ، قبلاً استریل نشده ، pH 6.2-6.8 اضافه می شود. محیط تصفیه شده و با بخار جریانی کسری استریل می شود.

چهارشنبه МРС-2.طراحی شده برای نگهداری در موزه گونه ها لاکتوباسیلوسبر اساس محیط MRS-1 با افزودن 0.15٪ آگار تهیه شده است. نتیجه یک محیط نیمه مایع است که شرایط بی هوازی بیشتری نسبت به محیط مایع ایجاد می کند.

چهارشنبه MRS-3.طراحی شده برای "ردیف رنگارنگ" در شناسایی باکتری های اسید لاکتیک. بر اساس محیط MRS-1 است ، اما بدون گلوکز ، عصاره کبدی و شیر هیدرولیز شده است. کربوهیدرات ها و الکل های پلی هیدریک به مقدار 0.5٪ اضافه می شوند. مقدار آگار استفاده شده 0.15 درصد است. pH محیط 7.0. کلروفنول قرمز (0.004٪) به عنوان یک شاخص عمل می کند. این نشانگر در 1-2 میلی لیتر الکل اتیلیک حل می شود و قبل از عقیم سازی به محیط اضافه می شود. قرمز کلروفنول در محدوده pH 4.8-6.4 رنگ را از قرمز بنفش به زرد انتقال می دهد.

عصاره کبد

جگر گوساله تازه را ریز خرد کرده و با آب ریخته می شود (برای 1 کیلوگرم جگر ، 1 لیتر آب). مخلوط به مدت 30 دقیقه جوشانده شده و فیلتر می شود و پس از آن با فشار 0.05 مگاپاسکال به مدت 20 دقیقه استریل می شود.

چهارشنبه 10

برای 1 لیتر مخمر آبجو (8٪ DM) یا 1 لیتر آب مخمر ، g: سولفات منگنز 0.05 ، سولفات منیزیم 0.2 ، سیستین یا سیستئین 0.2 ، پتاسیم هیدروژن فسفات 2 ، آمونیوم سیترات 0.2 ، استات سدیم 2.5 ، ساکارز 20 ، پپتون 10 ، اتولیزات مخمر 50 میلی لیتر. هر جزء به ترتیب مشخص شده در مخمر مالت حل می شود (برای لاکتوباسیلوس)یا آب مخمر (برای Leuconostoc).در حالت اول ، pH محیط 5.5 است ، در مورد دوم - 6.0. 1.5% آگار اضافه کنید و با بخار آب استریل کنید. گچ استریل را می توان به ظروف پتری اضافه کرد.

در 150 میلی لیتر آب گوجه فرنگی صاف شده، 0.75 میلی لیتر توئین 80 و 37.5 گرم گلوکز در حین حرارت دادن حل می شود، 5 میلی لیتر اتولیز مخمر، 600 میلی لیتر شیر بدون چربی (شیر بدون چربی) و 150 میلی لیتر مزوپاتامیا آگار 2 درصد ذوب شده اضافه می شود. به pH روی 7.0 تنظیم شده است. محیط را در لوله های آزمایش 6-7 میلی لیتر ریخته ، با فشار 0.05 مگاپاسکال به مدت 20 دقیقه استریل می شود ، سرد می شود ، با باکتری های اسید لاکتیک مورد بررسی تلقیح شده و 1-2 میلی لیتر آزار مزوپاتامیا ذوب شده 2٪ روی آن لایه می شود. در صورت تشکیل گاز ضعیف ، شاخه از محیط اصلی جدا می شود ، با تشکیل گاز قوی ، بالا می رود یا از لوله آزمایش خارج می شود.

محیط کشت برای پرورش باکتری های مخاط ساز

انتخاب 1.آگار گوشت-بتن با 10٪ ساکارز.

گزینه 2.ترکیب ، g / l: شکر خام 40 ، سدیم هیدروژن فسفات 2 ، کلرید سدیم 0.5 ، سولفات منیزیم 0.1 ، سولفات آهن 0.01 ، کربنات کلسیم 10 ، آگار 20.

چهارشنبه ویتنبری

ترکیب محیط شامل g / l: عصاره گوشت 5 ، پپتون 5 ، اتولیزات مخمر 50 (یا عصاره مخمر 50) ، محلول 1.6 br برومکرزول بنفش 1.4 میلی لیتر ، pH 6.8-7.0 است. با بخار جاری 3 بار به مدت 45 دقیقه با فاصله 1 روز عقیم سازی کنید.

رسانه ای برای رشد باکتریهای آسپروژنیک پوسیده

شیر آگار

شیر بدون چربی در لوله های آزمایش 5 میلی لیتری ریخته می شود و با بخار جاری یا در اتوکلاو به مدت 20 دقیقه با فشار 0.05 مگاپاسکال استریل می شود. جداگانه 3٪ آگار آبی تهیه کنید ، 4-5 میلی لیتر را در لوله های آزمایش بریزید و به مدت 30 دقیقه با فشار 0.1 مگاپاسکال استریل کنید. آگار ذوب شده ، به طور استریل با شیر ترکیب شده و در ظروف پتری ریخته می شود ، جایی که نمونه آزمایش قبلاً معرفی شده است.

محیط رشد باکتری های چربی شکن

گزینه I. 5 گرم پپتون و 3 میلی لیتر اتولیزات مخمر به 1 لیتر آب اضافه می شود. پس از تنظیم pH به 7.2-7.4 ، 1.5 ag آگار اضافه می شود. آگار ذوب می شود، محیط صاف می شود و 1٪ چربی شیر داغ یا روغن زیتون به آن اضافه می شود. مخلوط را هم بزنید ، داخل لوله های آزمایش بریزید و با فشار 0.1 مگاپاسکال به مدت 15 دقیقه استریل کنید.

گزینه 2.به مزوپاتامیا آگار 2-4 درصد چربی شیر یا روغن زیتون اضافه کنید. 10 میلی لیتر را در لوله های آزمایش بریزید و با فشار 0.1 مگاپاسکال به مدت 20 دقیقه استریل کنید. قبل از آبکاری محیط را کاملا تکان دهید.

نمونه ای از چنین محیطی ژلاتین با شیر هیدرولیز شده است. به شیر هیدرولیز شده (می توانید از کازئین هیدرولیز شده یا آبگوشت مزوپاتامیا استفاده کنید) 10% ژلاتین اضافه کنید، اجازه دهید تا پف کند و با هم زدن تا دمای 50 درجه سانتی گراد گرم شود. pH محیط 7.0-7.2. این محیط در لوله های آزمایش با فشار 0.075 مگاپاسکال به مدت 20 دقیقه فیلتر و استریل می شود.

محیط رشد باکتری های اسید استیک

4 جلد به مالت خالص یا کلم اضافه کنید. % اتیل الکل و 20 واحد در میلی لیتر آنتی بیوتیک مونومایسین که از رشد باکتری های اسید لاکتیک جلوگیری می کند.

محیط کشت بی هوازی

چهارشنبه وینوگرادسکی.در 1 لیتر آب مقطر، گرم را حل کنید: پتاسیم هیدروژن فسفات 1، سولفات منیزیم 0.5، سولفات منگنز 20، گلوکز 20، کلرید سدیم و کلرید آهن - آثار.

چهارشنبه کیتا تاروزی.قطعاتی از جگر یا گوشت ، که با آب جوشانده و شسته می شوند ، در لوله آزمایش فرو می روند تا قسمت پایینی آن را بپوشاند. براث مزوپاتامیا را با 1% گلوکز (pH 7.2-7.4) در هر "/2 از حجم لوله آزمایش بریزید و شناور را پایین بیاورید. روی آن یک لایه 1 سانتی متری روغن وازلین بریزید. به مدت 15 دقیقه با فشار 0.1 مگاپاسکال استریل کنید. 2 بار با فاصله 30 دقیقه.

محیط رشد برای بی هوازی های گرمادوست تولید کننده سولفید هیدروژن

ترکیب محیط شامل ، گرم / لیتر: پپتون 10 ، سولفات آهن 1 ، آگار 20. قبل از پر شدن ، یک میخ تمیز آهنی در هر لوله قرار می گیرد. پس از تلقیح قند ، یک لایه ژله نفتی استریل در لوله آزمایش ریخته می شود. در حضور باکتریهای تشکیل دهنده سولفید هیدروژن در قند ، مستعمرات سیاه مشخص در آگار تشکیل می شود.

رسانه های انتخابی توسط S.N. Vinogradskiy و M. Beyerinck وارد عمل میکروبیولوژیکی شدند. اینها مواد مغذی هستند که در آنها ، با افزودن یک یا چند ترکیب شیمیایی ، شرایط بهینه ای برای رشد و تکثیر یک نوع میکروارگانیسم (یا گروهی از میکروارگانیسم های مرتبط) ایجاد می شود و برای بقیه نامطلوب است. چنین محیط هایی عمدتاً برای جداسازی یک کشت خالص میکروارگانیسم ها از زیستگاه های طبیعی آنها و برای تجمع توده ای از فرهنگ ها (روش شیمیایی جداسازی یک کشت خالص) استفاده می شود. به عنوان مثال ، یک ماده مغذی که سرم اسب منعقد شده است ، یک محیط انتخابی برای باکتری های دیفتری ، آب پپتون قلیایی برای وبا ویبریوس ، آب صفرا برای عامل بیماری تب تیفوئید ، آبگوشت کبد برای بروسلا و غیره است.

تجمع میکروبها در محیطهای تغذیه ای انتخابی در بسیاری از موارد به عنوان یک مرحله اولیه مهم در جداسازی فرهنگهای خالص از مواد اولیه آزمایش (به عنوان مثال ، Vibrio cholerae یا باکتری تیفوئید از مدفوع بیماران یا ناقلین و غیره) عمل می کند.

منظورتان از مواد مغذی افتراقی چیست؟

رسانه های افتراقی - تشخیصی، رسانه هایی هستند که علاوه بر موادی که رشد و نمو میکروارگانیسم ها را تضمین می کنند، شامل موادی هستند که به عنوان سوبسترا برای آنزیم های خاص استفاده می شود. با توجه به تغییر کیفی در بستر ، وجود یک یا آنزیم دیگر تعیین می شود (با استفاده از شاخصی که به حضور محصولات تخریب بستر در محیط تغذیه واکنش نشان می دهد) ارزیابی می شود.

هر نوع میکروارگانیسم با مجموعه ای نسبتاً پایدار از آنزیم ها مشخص می شود. تعیین مجموعه ای از آنزیم ها با استفاده از رسانه های تشخیصی افتراقی به شما این امکان را می دهد که انواع میکروارگانیسم ها را متمایز کنید. به عنوان مثال ، آگار خون به شما امکان می دهد آنزیم همولیزین را تشخیص دهید ، رسانه های او - آنزیم های ساکارولیتیک (کربورازها) ، ژلاتین برای در نظر گرفتن خصوصیات پروتئولیتیک میکروب ها و غیره استفاده می شود.

آگار خون. وجود آنزیم همولیزین با تخریب گلبول های قرمز خون و تشکیل ناحیه نوری در اطراف میکروب هایی که روی آگار خون رشد کرده اند قضاوت می شود.

محیط های GIS وجود آنزیم ها - کربوآبراس ها ، که کربوهیدرات ها را به اسید تجزیه می کنند ، با تغییر pH محیط به سمت اسیدی و تغییر رنگ محیط تغذیه مشخص می شود. از تفاوت مجموعه آنزیم ها می توان برای بررسی خلوص فرهنگ جدا شده و همچنین برای تمایز سریع یک گونه از گونه های دیگر در طول مطالعه اولیه محصولات زراعی استفاده کرد.

معرف های شیمیایی

1. مواد شیمیایی چیست و چه کاربردی دارد؟

معرفهای شیمیایی- مواد مورد استفاده در عمل آزمایشگاهی برای انجام واکنش های شیمیایی مختلف.

در بیشتر موارد، مواد شیمیایی مواد فردی هستند، اما اغلب آنها ترکیب پیچیده ای دارند. به طور کلی طبقه بندی شده ای از معرفهای شیمیایی وجود ندارد ، اغلب آنها به معرفهای شیمیایی تحلیلی و سایر موارد تقسیم می شوند.

2. در دامپزشکی برای چه مواردی استفاده می شود؟

در دامپزشکی از معرف های شیمیایی برای اهداف تحلیلی و تشخیصی در بالینی، دامپزشکی و بهداشتی، بهداشتی، معاینه تخصصی، بیوشیمیایی و سایر مطالعات آزمایشگاهی استفاده می شود. روشهای تحقیقاتی که در عمل بیولوژیکی و بالینی مورد استفاده و توسعه قرار می گیرند ، طیف وسیعی از معرفهای شیمیایی را نیاز دارند که باید طیف وسیعی از الزامات را برآورده کنند. به عنوان مثال، مطالعات بالینی و بیوشیمیایی به بسترهای بسیار خالص برای آنزیم ها، خود آنزیم ها، معرف های گروه های خاص (SH، NH3، COOH - گروه ها، و غیره) نیاز دارند. برای انجام سنتزهای معدنی و آلی ، و همچنین برای تجزیه و تحلیل کمی و کیفی ، از جمله: در طی کنترل دامپزشکی و بهداشتی در صنایع مختلف، تجزیه و تحلیل) داروها، در طی آنالیزهای دامپزشکی، بهداشتی و بهداشتی مواد غذایی، هوا، آب و غیره، تعداد زیادی از طیف گسترده ای از معرف های شیمیایی بسیار خالص استفاده می شود.