Pamamaraan ng mga guhit na chromatography ng papel. GPM.1.2.0002.15 Chromatography sa papel. Chamber para sa pataas at pababang chromatography

Sa kasalukuyan, ang mga sumusunod na uri ng chromatography ng papel ay binuo: one-dimensional, two-dimensional, circular at electrophoretic. Ang one-dimensional at two-dimensional ay ginaganap sa dalawang bersyon (Larawan 6); pataas at pababang daloy ng solvent.

Fig.6

One-dimensional na pataas na chromatography.(Larawan 6 a). Maglagay ng 1-5 µl ng test solution gamit ang isang capillary sa isang strip ng chromatographic paper sa 2 cm mula sa ilalim na gilid. Kung ang nakatigil na yugto ay tubig, kung gayon ang papel ay hindi espesyal na ginagamot, dahil ang air-dry na papel ay naglalaman ng hanggang 20 - 22% na kahalumigmigan. Ang mobile phase, na puspos ng stationary phase, ay ibinubuhos sa ilalim ng chromatography vessel (sa isang cylinder o test tube).

Ang isang strip ng papel na may ilalim na gilid ay ibinaba sa likido, at ang itaas na gilid ay naayos upang ang papel ay malayang nakabitin nang hindi hinahawakan ang mga dingding ng sisidlan. Sa ilalim ng pagkilos ng mga puwersa ng capillary, ang mobile na likido ay tumataas sa papel at naghihiwalay sa mga bahagi ng pinaghalong, na, sa iba't ibang mga halaga Rf gumalaw sa isang layer ng papel sa hindi pantay na bilis. Itinuturing na kumpleto ang eksperimento kapag ang harap ng mobile phase ay halos umabot sa tuktok na gilid ng strip ng papel. Pagkatapos nito, ang chromatogram ay tinanggal mula sa sisidlan, ang front line ay minarkahan, tuyo at binuo.

Ang lapad ng strip ay karaniwang 2 - 5 cm sa kaso ng paglalapat ng isang sample. Ang haba nito ay tinutukoy ng mga kondisyon ng paghihiwalay. Kapag nag-chromatography ng isang bilang ng mga solusyon nang sabay-sabay, kumuha ng isang malawak na strip ng papel; Ang isang panimulang linya ay iginuhit sa kahabaan ng mas mababang gilid nito, kung saan ang mga solusyon sa pagsubok ay inilapat na may isang capillary sa layo na 2-3 cm mula sa bawat isa.

One-dimensional na pababang chromatography.

Sa itaas na bahagi ng silindro (tingnan ang Fig. 6b.) Ang isang maliit na paliguan ay naayos kung saan ang isang mobile solvent, na puspos ng isang nakatigil, ay ibinuhos. Ang isang bote na naglalaman ng isang nakatigil na solvent na puspos ng isang mobile ay inilalagay sa ilalim ng silindro. Lumilikha ito ng isang mayamang kapaligiran ng singaw sa silindro, na pumipigil sa solvent mula sa pagsingaw mula sa papel.

Ang isang patak ng solusyon sa pagsubok ay inilapat sa isang strip ng papel sa layo na 5 cm mula sa tuktok na gilid; ang gilid ng strip ay nahuhulog sa isang paliguan ng mobile phase. Ang solvent mula sa paliguan ay dumadaloy sa papel sa ilalim ng pagkilos ng mga puwersa ng maliliit na ugat at gravity. Itinuturing na kumpleto ang eksperimento kapag ang harap ng solvent ay umabot sa 3-5 cm mula sa ilalim na gilid ng papel.

Circular chromatography. Upang makakuha ng isang pabilog na chromatogram, isang patak ng solusyon sa pagsubok ay idinagdag sa gitna ng bilog ng chromatographic na papel. Ito ay maginhawa upang isagawa ang gawain sa isang desiccator. Ang diameter ng bilog na papel ay dapat na 2-3 cm na mas malaki kaysa sa diameter ng mas mababang makitid na ibabaw ng desiccator. Ang bilog ay inilalagay sa makitid na bahagi ng desiccator, kung saan ibinubuhos ang isang halo ng mga nakatigil at mobile na solvent. Upang magbigay ng solvent, gupitin ang isang strip mula sa gilid ng bilog hanggang sa gitna ("wick") sa isang bilog, yumuko ito at ibaba ito sa solvent. Sa nagresultang chromatogram, ang mga pinaghiwalay na sangkap ay bumubuo ng mga concentric na bilog.

Dalawang-dimensional na chromatography. Kung hindi posible na paghiwalayin ang isang kumplikadong pinaghalong may isang solvent, dalawang solvent na may magkakaibang mga koepisyent ng pamamahagi ay ginagamit nang sunud-sunod.

Para sa two-dimensional chromatography, ginagamit ang mga square sheet ng papel na may sukat na 20X20, 30X30, 40X40 cm. Sa simula ng eksperimento, ang test solution ay inilapat sa papel sa kaliwang sulok nito sa layo na 5 cm mula sa kaliwa at mula sa ang mga gilid sa ibaba. Matapos matuyo ang lugar, ang papel ay inilalagay sa isang sisidlan ng chromatography, ang ilalim na gilid ay inilubog sa isa sa mga napiling solvents at chromatographed gamit ang pataas na paraan. Pagkatapos matuyo, ang papel ay iniikot 90° counterclockwise, inilagay sa isang bagong chromatography vessel na naglalaman ng pangalawang solvent, at chromatographed gamit ang pataas na paraan. Pagkatapos ng pag-unlad, ang isang dalawang-dimensional na chromatogram ay nakuha.

Papel para sa chromatography. Sa partition chromatography, ang mga sumusunod na kinakailangan ay ipinapataw sa papel: ito ay dapat na chemically pure, chemically at adsorption neutral, pare-pareho ang density, at magbigay ng isang tiyak na bilis ng paggalaw ng solvent. Sa USSR, apat na grado ng chromatographic na papel ang ginawa: No. 1, 2, 3, 4. Ang bawat numero ay naiiba sa iba sa density, at samakatuwid ay sa bilis ng paggalaw ng solvent. Ang Papel No. 1 at 2 ay tinatawag na "mabilis", at ang No. 3 at 4 ay tinatawag na "mabagal". Ang papel ng Chromatography ay dapat maglaman ng sapat na dami ng nakatigil na yugto. Ang mga maginoo na papel ay hydrophilic, kaya kung ang tubig ay ginagamit bilang isang nakatigil na yugto, hindi na kailangang espesyal na basain ang papel.

Upang paghiwalayin ang ilang partikular na pinaghalong mga organikong compound na hindi matutunaw sa tubig, ipinapayong i-convert ang hydrophilic na papel sa hydrophobic na papel. Upang gawin ito, ang papel ay acetylated sa pamamagitan ng paggamot sa 10 g ng papel na may halo ng 9 ml ng acetic anhydride, 100 ml ng petrolyo eter at 8-10 patak ng puro sulfuric acid. Pagkatapos ng acetylation, ang papel ay pinapagbinhi ng iba't ibang mga hydrophobic substance (1% na solusyon ng paraffin sa petrolyo eter, 0.5% na solusyon ng goma sa benzene, atbp.). Ang tamang pagpili ng mga solvent ay pinakamahalaga para sa paghihiwalay ng isang timpla sa pamamagitan ng chromatography sa papel. Sa mesa Ipinapakita sa talahanayan 7 ang mga mobile phase na kadalasang ginagamit sa paper chromatography para sa paghihiwalay ng mga mixture (stationary phase - tubig).

Pag-unlad ng papel chromatograms. Sa karamihan ng mga kaso, ang chromatogram sa papel ay nananatiling walang kulay pagkatapos matuyo. Samakatuwid, ang mga resultang chromatograms ay ipinapakita. Para sa layuning ito, ang mga solusyon ng iba't ibang mga sangkap ay ginagamit, sa panahon ng pakikipag-ugnayan kung saan sa mga bahagi ng pinaghalong sinusuri, ang mga kulay na compound ay nabuo. Ang mga sangkap sa nabuong chromatogram ay maaari ding matukoy ng husay sa pamamagitan ng luminescence sa ultraviolet light.

Upang matukoy ang mga bahagi ng isang timpla Ang pamamaraang "saksi" ay ginagamit sa chromatogram. Ang pamamaraang ito ay batay sa katotohanan na ang koepisyent ng pamamahagi Rf halos independyente sa pagkakaroon ng mga dayuhang sangkap.

Ang proseso ng chromatographic na nagaganap sa isang sheet ng filter na papel habang gumagalaw sa mga capillary nito at sa ibabaw ng mobile phase,

tinatawag na paper chromatography.

Ang nakatigil na yugto ay alinman sa papel mismo o ang mga sangkap

pagpapakulo na inilapat sa mga hibla nito. Ang mekanismo ng paper chromatography ay maaaring partition, adsorption o ion exchange. muling-

ang paggalaw ng mobile phase ay nangyayari sa ilalim lamang ng pagkilos ng capillary

pwersa (ascending chromatography), o sa ilalim ng impluwensya ng capillary forces at gravity (pababang chromatography).

Sa panahon ng chromatography, ang nasuri na mga sangkap ay nabuo sa buccal

mage round o oval spot (zones). Ang hanay ng mga spot na nakuha sa panahon ng chromatography ng isang ibinigay na nasuri na sample ay tinatawag na chromatographic

matogram.

Ang mobility ng isang substance sa panahon ng chromatography ay nailalarawan sa pamamagitan ng

metric Rf, na ang ratio ng distansya mula sa start line hanggang sa gitna ng spot ng analyte sa distansya mula sa start line hanggang sa front line ng mobile phase (tingnan ang General Pharmacopoeia Monograph "Chromatography").

Ang pagiging tunay ng nasuri na sangkap ay tinutukoy sa parehong oras

chromatography sa isang sheet ng papel ng na-analyze at stand-

sangkap ng regalo. Kung magkapareho ang mga sample, ang mga katumbas na spot sa mga chromatogram ay may parehong hitsura at magkaparehong R f value. Para sa pagkakakilanlan

Para sa layuning ito, kung minsan ay ipinapayong i-chromatograph ang isang halo ng pantay na halaga ng analyte at ang karaniwang sangkap. Dapat ipakita ang chromatogram

magbigay ng isang puwesto. Ang mga kondisyon ng Chromatography ay dapat mapili upang

upang ang mga halaga ng R f ay naiiba sa 0 at 1.

Kapag sinusuri ang kadalisayan, ang mga impurities at ang pangunahing sangkap ay dapat na may iba't ibang mga halaga ng Rf. Sa kasong ito, maaaring hatulan ng isa ang antas ng kadalisayan ng analyte.

ng sangkap na sinusuri ayon sa laki at intensity ng kulay (o pagsipsip)

may nakitang impurity spot sa chromatogram. Ang nilalaman ng karumihan ay maaaring matukoy nang semi-quantitative. Upang gawin ito, sa isang sheet ng papel -

gi sabay-sabay chromatograph isang tiyak na halaga ng nasuri

sangkap at ilang sample ng natukoy na karumihan (saksi) c

iba't ibang, tiyak na kilalang mga konsentrasyon. Ang nilalaman ng isang karumihan sa nasuri na sample ay tinatasa sa pamamagitan ng paghahambing ng lugar nito sa chromatogram batay sa kumbinasyon ng lugar ng lugar at intensity ng kulay (o pagsipsip) sa

saksi spot. Kung ang mga impurity spot ay sapat na magkatulad sa hugis at approx.

pintura na may mga mantsa ng pangunahing sangkap, na kinuha sa parehong dami, pinapayagan

posibleng gumamit ng angkop na dami ng pangunahing sangkap bilang

bilang saksi.

Para sa quantitative analysis, ginagamit ang spectrophotometric o video densitometers. Para sa pagproseso ng mga chromatogram sa nakikitang rehiyon, espesyal

Maipapayo na gumamit ng mga flatbed scanner at naaangkop na software.

Posible rin na mabilang ang mga sangkap pagkatapos na makuha ang mga ito mula sa chromatogram. Upang gawin ito, ang mga spot ay pinutol at nakuha

pinaghihiwalay ang sangkap. Ang nilalaman ng analyte sa extract o dry residue pagkatapos ng distillation ng solvent ay tinutukoy ng anumang paraan,

angkop para sa pagtukoy ng mababang konsentrasyon.

KAGAMITAN

Upang magsagawa ng chromatography sa papel, ginagamit ang selyadong papel.

mga silid ng paliguan na gawa sa hindi gumagalaw na materyal at nagbibigay-daan

Subaybayan ang pag-usad ng proseso ng paghihiwalay nang sarado ang takip ng silid. Kadalasan, ang mga glass beakers o cylinder na may mga papasok na elemento ay ginagamit bilang mga silid.

na may huwad na takip at bukod pa rito ay selyadong. Ang talukap ng mata ay maaaring may mga butas na pumapasok (gate) para sa pagdaragdag ng solvent o pagtanggal ng labis na presyon sa silid.

Kapag nagsasagawa ng pababang chromatography, ang isang sisidlan para sa mobile phase (bangka) ay inilalagay sa itaas na bahagi ng kamara. Ang bangka ay dapat maglaman ng dami ng mobile phase na sapat upang magsagawa ng hindi bababa sa isa

maramihang chromatography. Ang haba ng bangka ay dapat lumampas sa lapad

Well, isang sheet ng chromatography paper. Ang camera ay dapat na nilagyan

mga aparato para sa pag-aayos ng isang sheet ng chromatography na papel sa lugar ng pagtatrabaho

posisyon at para sa pagpapasok ng mobile phase sa bangka.

Kapag nagsasagawa ng pataas na chromatography, inilalagay ang mobile phase

ibuhos ang alinman sa isang bangka na naka-install sa ilalim ng silid, o ibuhos

hanggang sa ibaba ng silid.

Ang mga panloob na dingding ng silid ay may linya na may filter na papel, na nagpapadali sa mas mabilis at mas kumpletong saturation ng silid na may mga solvent na singaw.

lei na kasama sa mobile phase.

Ang paghahanda ng kagamitan, chromatographic paper at mobile phase ay ibinibigay sa pribadong pharmacopoeial monographs.

1.2. THIN LAYER CHROMATOGRAPHY (OFS 42-0094-09)

Chromatographic na proseso sa isang manipis na layer ng sorbent na idineposito sa isang inert solid support (salamin, metal o polimer)

neutron), na tinatawag na thin layer chromatography o thin layer chromatography

com layer ng sorbent (TLC).

Ang paghihiwalay ay maaaring isagawa sa pamamagitan ng ilang mga mekanismo: adsorp-

asyon, pamamahagi, ion-pair, ion-exchange, pagbubukod-

nomu (gel-petrating), chiral, o anumang kumbinasyon nito.

Bilang resulta ng paggalaw ng analyte at ang eluent sa ilalim ng impluwensya

Ang pagkilos ng mga puwersa ng capillary ay naghihiwalay sa pinaghalong mga sangkap na pinag-aaralan sa mga bahagi nito. Kapag pinaghiwalay, ang mga sangkap ay bumubuo ng mga sorbents sa ibabaw.

benth round o ellipsoidal spot o stripes (chromatographic zones).

Ang kadaliang kumilos ng isang sangkap sa panahon ng paghihiwalay ay nailalarawan sa pamamagitan ng halaga R f

at R s (tingnan ang General Pharmacopoeia Monograph "Chromatography", equation 6 at Fig. 1.4).

Ang mga parameter na R f at R s ay ginagamit upang makilala ang mga sangkap at upang suriin ang kakayahan sa paghihiwalay ng system.

Pagsubok sa pagiging tunay (pagkakakilanlan) sinuri

ang mga sangkap ay isinasagawa sa pamamagitan ng sabay-sabay na chromatography ng parehong dami ng analyte at isang karaniwang sample sa parehong chromatogram. Bukod dito, kung ang mga sangkap ay magkapareho, kung gayon ang kaukulang mga chromatographic zone ay may parehong hugis, intensity.

pagsipsip o kulay at pantay na halaga ng Rf.

Kapag nasubok para sa kadalisayan Ang pangunahing sangkap at mga impurities sa ilalim ng mga kondisyon ng chromatography ay dapat magkaroon ng iba't ibang mga halaga ng R f. Sa kasong ito, maaaring hatulan ng isa ang antas ng kadalisayan ng nasuri na sangkap sa pamamagitan ng laki at intensity

ang mga spot ng impurities na nakita sa chromatogram. Ang kanilang nilalaman ay maaaring matukoy nang semi-quantitative. Upang gawin ito, ang ilang mga dami ng analyte at mga saksi ay inilapat sa plato. Upang matukoy

dibisyon ng mga natukoy na impurities, ang mga karaniwang sample ng mga natukoy na impurities ay ginagamit bilang mga saksi sa dami na naaayon sa

naaayon sa kanilang tunay na nilalaman. Upang matukoy ang hindi makikilala

ng mga impurities, ang mga reference na solusyon ay kadalasang ginagamit, inihanda

diluted sa pamamagitan ng diluting ang pansubok na solusyon tulad ng tinukoy sa pribado

Artikulo ng Macopean. Ang nilalaman ng karumihan sa nasuri na sangkap ay tinatantya

Ginagawa ang mga ito sa pamamagitan ng paghahambing ng impurity zone sa mga tuntunin ng kabuuan ng laki at intensity nito sa kaukulang mga spot ng saksi.

dami ang mga sangkap sa chromatogram ay isinasagawa,

karaniwang densitometrically.

Mga pangunahing kagamitan at materyales:

– mga plato na may isang nakapirming layer ng sorbent ng iba't ibang mga pagbabago;

– mga silid ng chromatographic;

– naka-calibrate na mga capillary at microsyringes;

– mga device para sa paglalapat ng mga detecting reagents sa chromatograms -

mga produkto (spray gun, mga silid para sa paglulubog ng chro-

matograms sa solusyon, atbp.);

– karaniwang mga sangkap, solvents, reagents para sa pagtuklas ng chromium-

mga lugar ng totograpiko;

ultrachemiscope na may mga UV lamp sa 254 nm at 365 nm.

Ang lampara na ginamit ay dapat matugunan ang sumusunod na pagsubok.

Sinusuri ang pagpapatakbo ng lampara. 5 µl ng silica gel G ay inilapat sa plato

0.04% na solusyon ng sodium salicylate sa 96% na alkohol para sa mga lamp na may maximum at 3-

radiation sa 254 nm o 5 µl ng 0.2% na solusyon ng sodium salicylate sa alkohol

96% para sa mga lamp na may maximum na radiation sa 365 nm sa anyo ng isang lugar na may diameter na halos 5 mm; dapat lumiwanag ang lugar.

Kapag nagsasagawa ng mga pagsusuri, ang distansya sa pagitan ng lampara at chromatography

ang suklay ay hindi dapat lumampas sa distansya na ginamit kapag sinusuri ang pagpapatakbo ng lampara.

Tandaan. Ang alkohol na ginamit ay dapat na walang fluorescent substance.

Mga chromatographic plate

Ang TLC plate ay isang solidong suporta (glass

metal, metal o polimer) na may inilapat na layer ng sorbent. Tol-

kapal ng sorbent layer mula 0.1 hanggang 0.25 mm para sa analytical na bersyon at mula 0.5

hanggang 2.0 mm para sa paghahanda.

Maaaring maglaman ng fluorescent ang mga handa na chromatographic plate

indicator para sa pag-detect ng mga substance na sumisipsip ng UV

mga spectral na rehiyon sa 254 at 365 nm.

Ang laki ng butil ng sorbent para sa analytical na bersyon ng TLC ay

5–20 µm. Kasama ng gayong mga plato, maaari mong gamitin ang lubos na mahusay

tive chromatographic plates na naglalaman ng sorbent na may mga particle na 5-7 μm ang laki. Ginagawang posible ng gayong mga plato na mapataas ang kahusayan sa paghihiwalay at bawasan ang limitasyon ng pagtuklas ng mga chromatographic zone.

Ang mga plato na may monolithic sorbents at mga plato ay ginawa din

ki na may concentrating zone (two-phase plates). Pinakabagong gamit

ay ginagamit sa pagsusuri sa parmasyutiko upang paghiwalayin ang mga kumplikado at magkakaibang mga mixture (mga extract mula sa mga hilaw na materyales na panggamot ng halaman, mga solusyon ng mga tablet,

kasalukuyang may mga pantulong na bahagi, malambot na mga form ng dosis, halo-halong

Mga silid ng Chromatography

Ang mga silid ng Chromatography ay ginagamit para sa patayo o pahalang

zonal elution na may mga selyadong takip. Mga camera para sa pahalang

Ang tal elution ay nilagyan din ng mga device para sa pagbibigay ng eluent sa plato. Bago ang pagsusuri, ang mga panloob na dingding ng silid ay karaniwang may linya na may filter na papel na binasa ng mobile phase. Para sa vertical elution, ang mga chamber na may partition sa gitna ng ibaba ay ginagamit.

Ang paggamit ng horizontal elution chamber ay nagbibigay-daan para sa sabay-sabay na elution mula sa magkabilang panig ng plato.

mabaho, na doble ang produktibidad ng pagsusuri kumpara sa

gamit ang isang vertical elution chamber. Binabawasan din nito ang pagkonsumo ng mobile phase ng humigit-kumulang 10 beses. Sa ika-

sa isang pahalang na silid, ang paggalaw ng mobile phase sa kahabaan ng plato ay nangyayari lamang dahil sa mga puwersa ng capillary, walang kontribusyon mula sa grabidad, na nagpapataas ng kahusayan sa paghihiwalay kumpara sa mga silid para sa vertical

cal elution.

Mga mobile phase (MP)

Ang mga mobile phase (eluent) ay dapat na mas mababa ang kasalukuyang

hindi sa sorbent (NF, stationary phase) o sa mga naghihiwalay na bahagi

aking mga mixtures. Ang PF ay dapat ding sumingaw ng medyo mabilis mula sa ibabaw ng mga chromatogram pagkatapos ng elution.

Upang sugpuin ang paghihiwalay ng mga polar molecule ng mga bahagi ng paghihiwalay

ang mga sangkap na may acidic o pangunahing kalikasan ay idinagdag sa pinaghalong ibinubuhos

(mga modifier).

Paglalapat ng mga sample

Kung ito ay ipinahiwatig sa mga pribadong pharmacopoeial monograph, ang mga plato ay pre-

lubusan na hugasan ng solvent at isinaaktibo sa pamamagitan ng pag-init sa loob ng 1 oras

sa 100–105 C sa isang drying cabinet. Bago mag-apply ng mga sample, ang mga plato ay dapat na naka-imbak sa isang hermetically sealed desiccator. Paglalapat ng mga sample

magpakitang gilas:

– naka-calibrate na mga capillary na may mapurol na dulo;

– piston microsyringes na may mapurol na dulo ng karayom;

– semi-awtomatiko o awtomatikong mga applicator.

Ang aplikasyon ay isinasagawa sa dalawang paraan: sa anyo ng mga spot (2-5 mm diameter

metro) na may mga pagitan sa pagitan ng mga spot na hindi bababa sa 10 mm at sa anyo ng mahabang guhitan

mula 10 hanggang 20 mm na may pagitan ng hindi bababa sa 10 mm. Ang distansya ng panimulang linya mula sa ilalim na gilid ng plato ay dapat na hindi bababa sa 10 mm.

Upang maiwasan ang "mga epekto sa gilid" ng pagguho ng harapan ng PF sa panahon ng proseso ng elution,

bago mag-apply ng mga sample, simutin ang magkabilang panig ng plano-

mabahong layer ng sorbent na 2-3 mm ang lapad. Ang mga distansya sa panimulang linya mula sa mga gilid na gilid ng plato hanggang sa mga lugar kung saan inilapat ang una at huling mga sample ay dapat na

dapat na tayo ay hindi bababa sa 10 mm. Sa panahon ng aplikasyon ng mga sample, ito ay hindi katanggap-tanggap sa

pinsala sa sorbent sa panimulang linya. Pagpapatuyo ng mga inilapat na sample

gumanap sa isang daloy ng malamig o mainit na hangin, o sa isang espesyal na electrically heated table.

Mga pamamaraan ng elution

Ang mga sumusunod na paraan ng elution ay ginagamit: ascending elution

tion (single- at multi-stage, one-dimensional at two-dimensional - na may pag-ikot ng eroplano

pader sa 90 o 180) at pahalang.

Pataas na chromatography

Maliban kung tinukoy sa isang pribadong pharmacopoeial monograph, ang plato na may mga inilapat na sample ay inilalagay nang patayo sa silid, dati

puspos ng mga singaw ng PF sa loob ng 1 oras sa 20–25 C. Ang antas ng PF ay dapat na nasa ibaba ng panimulang linya. Ang silid ay sarado at ang proseso ay isinasagawa sa

20–25 C sa isang lugar na protektado mula sa liwanag. Matapos madaanan ang harap ng PF,

nakatayo na tinukoy sa pribadong monograph, ang plato ay inalis mula sa silid, tuyo at binuo sa ilalim ng mga iniresetang kondisyon.

Kapag nagsasagawa ng two-dimensional chromatography, ang plate ay pinatuyong pagkatapos ng chromatography sa unang direksyon at chromatographed sa isang direksyon na patayo sa una.

Pahalang na kromatograpiya

Ang plato na may mga inilapat na sample ay inilalagay sa silid at nakadirekta sa

PF kasalukuyang mula sa tray patungo sa silid ayon sa mga tagubilin para sa aparato para sa pahalang na elution. Ang proseso ay isinasagawa sa 20–25 C (kung ito ay ipinahiwatig sa pribado

Macopean article, sabay-sabay mula sa magkabilang panig ng plato). co-

kung saan ang PF ay pumasa sa distansya na tinukoy sa pribadong pharmacopoeial monograph, pla-

Ang pelikula ay inalis, pinatuyo at binuo sa ilalim ng mga iniresetang kondisyon.

Ang two-dimensional chromatography ay ginagawa gaya ng inilarawan sa seksyong "Pagpapanumbalik"

kasalukuyang chromatography".

Mga paraan ng pagtuklas

Detection (detection) ng mga chromatographic zone pagkatapos ng pagsubok

Ang mga qualitative at semiquantitative na mga pagsubok sa TLC ay isinasagawa sa mga sumusunod na paraan:

- pagmamasid sa ilalim ng ilaw ng UV;

– pag-spray ng mga solusyon ng mga reagents ng pagtuklas;

– sa pamamagitan ng pagpapanatili ng detecting reagent sa singaw;

– paglulubog sa mga solusyon ng detection reagents sa mga espesyal na silid.

High performance thin layer chromatography (HPTLC)

Ang kahusayan ng paghihiwalay ay tumataas kapwa dahil sa pagtaas sa lugar ng paghihiwalay sa pagitan ng mga mobile at nakatigil na mga yugto dahil sa pagbaba ng diameter

metro ng mga sorbent particle, at dahil sa higit na pagkakapareho ng mga sukat ng mga particle na ito. Gumamit ng mga plato ng HPTLC na ginawa gaya ng dati

phase (polar NF) at reversed-phase (non-polar NF) na mga variation

Kung ikukumpara sa klasikal na TLC, ang paggamit ng mga high-performance plate ay nagbibigay-daan sa:

– dagdagan ang bilang ng mga nasuri na sample sa pamamagitan ng pagbabawas ng diameter ng mga panimulang spot (hanggang 1–2 mm) o haba ng strip (hanggang 5–10 mm);

– bawasan ang mga puwang sa pagitan ng mga panimulang lugar (hanggang sa 5 mm);

– bawasan ang oras ng chromatography sa pamamagitan ng pagbawas sa hanay ng mobile phase (MP) na harap;

– bawasan ang pagkonsumo (volume) ng PF;

– bawasan ang mga limitasyon ng pagtuklas ng mga mantsa at dami ng pagpapasiya ng mga analyte ng 10–100 beses.

Tinitiyak ng paggamit ng HPTLC ang paggawa ng mas mga compact spot ng mga pinaghiwalay na compound, na nagpapabuti sa metrological na katangian ng dami.

tumpak na pagpapasiya gamit ang pag-scan ng chromatodenitometry.

Sa paper chromatography, ang nakatigil na likidong bahagi ay tubig, na na-adsorbed ng mga hibla ng papel sa halagang hanggang 20%, o ibang polar solvent; Ang butyl alcohol, collidin, phenol, at cresols ay kadalasang ginagamit bilang mobile phase. Ang carrier ay mahusay na na-filter na papel, medyo pare-pareho sa kapal at density.

Upang paghiwalayin ang pinaghalong gamit ang chromatography ng papel, ang isang patak ng solusyon sa pagsubok ay inilapat sa isang strip ng na-filter na papel na 15-20 mm ang lapad at 300-500 mm ang haba sa layo na 20-30 mm mula sa dulo. Ang dulo ng strip ay nahuhulog sa isang naaangkop na organikong solvent, na dating puspos ng tubig, at ang buong aparato ay inilalagay sa isang selyadong silid, ang kapaligiran kung saan ay puspos ng mga singaw ng isang organikong solvent at tubig. Ang paggalaw ng solvent kasama ang strip ng papel, dahil sa mga puwersa ng capillary, ay nagsisiguro sa pagbuo ng chromatogram, na may mga indibidwal na zone na gumagalaw sa iba't ibang bilis.

Dalawang-dimensional na chromatography ng papel

Kahit na mas tumpak na mga resulta ay nakuha gamit ang tinatawag na dalawang-dimensional na papel chromatography. Para sa pagpipiliang ito, huwag gumamit ng mga piraso ng na-filter na papel, ngunit mga parihaba na may sukat na humigit-kumulang 400x500 mm. Ang isang patak ng solusyon sa pagsubok ay inilapat malapit sa isa sa mga vertices ng rektanggulo, at ang chromatogram ay binuo ng dalawang beses na may iba't ibang mga solvents, halimbawa, phenol at collidine, una sa isang solvent, at pagkatapos, pagkatapos ng pag-ikot ng 90?, sa isa pa .

Mga pamamaraan para sa pagbuo ng mga chromatogram

Pataas na chromatography. Ang papel ay inilubog sa ibabang dulo nito sa mobile phase. Ang pagtaas ng likido ay nangyayari sa ilalim ng pagkilos ng mga puwersa ng maliliit na ugat.

"+" Ang aparato ay simple, ang quantitative assessment ng mga resulta ay posible;

"-" Ang gravity at mga puwersa ng capillary ay kumikilos sa magkasalungat na direksyon; ang bilis ng pagsipsip ay bumaba nang malaki pagkatapos tumaas sa 20 cm. Naaangkop para sa mga sangkap na may medyo malaking pagkakaiba sa mga halaga ng Rf

Pababang chromatography. Ang papel ay nahuhulog sa mobile phase kasama ang itaas na dulo nito. Ang likidong paagusan ay nangyayari sa ilalim ng impluwensya ng grabidad.

"+" - mabilis na pagpasa ng mobile phase; walang limitasyon sa haba ng landas ng mga spot (flow chromatogram); Posibleng paghiwalayin ang mga sangkap na may bahagyang magkakaibang mga halaga ng Rf at tumyak ng dami ng mga resulta.

"-" - Ang aparato ay mas kumplikado kaysa para sa pataas na chromatography.

kanin. 5.

Radial-horizontal chromatography. Ang mobile phase ay patuloy na inilalapat sa gitna ng isang bilog na piraso ng papel.

"+" - Mabilis na pagpapatupad, ang mga zone ay makitid at malinaw na tinukoy; higit na pagkakumpleto ng paghihiwalay kaysa sa mga unang pamamaraan.

“-” - Tanging isang husay na pagtatasa ng mga resulta ang posible; ang paggamit ng "mga saksi" ay posible lamang sa tinatawag na "lihim na pamamaraan" (i.e., paghahati ng papel sa mga sektor).

Paghahanda ng mobile phase

Ang pinakasimpleng kaso ng chromatography sa papel ay inilarawan sa ibaba - pataas na chromatography na may tubig bilang pataas na yugto.

Ang mga bahagi ng napiling solvent system ay pinaghalo sa tinukoy na ratio sa isang separating funnel. Ang dalawang immiscible phase ay dinadala sa mutual saturation sa pamamagitan ng pag-alog; Ang organic phase ay gumaganap bilang mobile phase.

Paglalapat ng sangkap

Ang isang strip ay pinutol mula sa isang tiyak na uri ng papel, ang laki nito ay tumutugma sa laki ng silindro na ginagamit para sa chromatography. Sa layo na 3 cm mula sa ilalim na gilid, ang isang linya ng pagmamarka ay inilapat gamit ang isang lapis. Sa linyang ito, ang mga panimulang punto ay minarkahan ng 2 - 2.5 cm mula sa bawat isa at mula sa mga gilid ng strip. Ang bawat panimulang punto ay inilapat gamit ang isang espesyal na pipette; ito ay gumagawa ng mga spot na halos 1 cm ang lapad. Ang solvent ay pinahihintulutang mag-evaporate.

manipis na layer chromatography solvent na papel

Pagpapakita

Ang mobile phase ay ibinubuhos sa ilalim ng silindro at isang strip ng papel ay sinuspinde. Iwanan itong nakabitin nang magdamag, at pagkatapos ay ang ilalim na gilid ng strip ay nahuhulog sa 0.5 cm sa mobile phase. Matapos ang solvent ay tumaas ng 20-25 cm, ang strip ay tinanggal, ang posisyon ng solvent front ay minarkahan ng isang lapis, at ang chromatogram ay tuyo.

International Festival "Mga Bituin ng Bagong Siglo" - 2013

Natural Sciences (14 hanggang 17 taong gulang)

Proyekto ng mag-aaral

Chromatography

Nakumpleto ng: mag-aaral sa ika-7 baitang

Blokhina Tatyana

Sinuri ni: guro ng kimika

Volkhov district chemical club

MOBU "Volkhov Secondary School No. 1"

Volkhov

1. Panimula……………………………………………………………..pahina 3

2. Layunin, pamamaraan, isyu ng proyekto………………………………pahina 4

3. at ang pagtuklas ng chromatography. ………………………..pahina 5

4. Chromatography. Mga pamamaraan ng Chromatography………………….pahina 8

5. Eksperimental na bahagi……………………………..pahina 13

6. Paglalapat ng chromatography………………………………….p.

7. Panitikan……………………………………………………………………p.

Target: Upang pag-aralan ang kakanyahan ng isa sa mga pinaka ginagamit na pamamaraan ng pagsusuri ng kemikal - chromatography, upang magsagawa ng mga eksperimento na maaaring isagawa sa mga kondisyon ng paaralan.

Mga problemang isyu ng proyekto:

· Ano ang chromatography?

· Anong mga uri ng chromatography ang mayroon?

· Alin sa mga ito ang maaaring gamitin sa mga setting ng paaralan?

· Anong mga sangkap ang maaaring ihiwalay sa isang halo gamit ang chromatography?

· Posible bang makakita ng mga sangkap na walang kulay?

· Alin sa mga available na chromatographic na pamamaraan ang mas advanced?

Mga yugto ng proyekto

1. Koleksyon ng impormasyon sa paksa ng proyekto

2. Pagsasagawa ng eksperimento

3. Pagsulat ng abstrak at paggawa ng presentasyon

1. Panimula

Ang Chromatography ay isa sa mga pinakakaraniwang pamamaraan ng pagsusuri ng kemikal sa lahat ng mga laboratoryo sa mundo. Ang lumikha ng pamamaraan, bilang isang botanista, ay pinangalanang kabilang sa daang pinakadakilang chemist sa lahat ng panahon nang tumpak para sa paglikha ng pamamaraan.

Biological chemistry" href="/text/category/biologicheskaya_hiimya/" rel="bookmark">plant biochemist. Nilikha ang temporotagrophic method. Inimbestigahan ang mga pigment ng mga dahon ng halaman, nakakuha ng mga purong chlorophyll a, b at c at isang bilang ng mga xanthophyll isomer. Ang pagtuklas ng Kulay ay malawakang paggamit at pagkilala mula noong unang bahagi ng 1930s sa paghihiwalay at pagkakakilanlan ng iba't ibang mga pigment, bitamina, enzymes, hormones at iba pang mga organic at inorganic na compound at nagsilbing batayan para sa paglikha ng isang bilang ng mga bagong lugar ng analytical chemistry (gas chromatography, liquid chromatography, thin layer chromatography).

Nakakuha pa nga siya ng biological na apelyido - Kulay... Kung tutuusin, para sa mga halaman, ang mga bulaklak ay ang quintessence ng kanilang pagkatao, ang pag-asa para sa buhay na walang hanggan. O marahil ang apelyido ay hindi sumasalamin sa isang tiyak na kulay ng lilac o alder, ngunit ang lilim, kulay, kulay ng langit o damo.
Para bang na-encrypt niya ang kanyang pangalan sa pamagat ng kanyang pangunahing natuklasan. Ang salitang "chromatography" ay nabuo mula sa dalawang salitang Griyego: "chromatos" - kulay, pangkulay at "graphia" - pag-record.
Si Mikhail Semenovich ay ipinanganak noong Mayo 14, 1872 sa isang internasyonal na pamilya ng isang Ruso at isang Italyano. Tulad ng sinabi nila, ang kasal na ito ay natapos sa malaking pag-ibig.
Natanggap niya ang kanyang edukasyon sa Switzerland, sa Unibersidad ng Geneva. Doon, noong 1896, ipinagtanggol ni Tsvet ang kanyang disertasyon para sa antas ng Doctor of Natural Sciences.
Si Mikhail Semenovich ay matatas sa Aleman, Pranses, Italyano at Ingles. Noong 1897, lumipat siya sa makasaysayang tinubuang-bayan ng kanyang ama, ang Russia.
Sa loob ng ilang panahon, nagtrabaho si Doctor Tsvet sa St. Petersburg Biological Laboratory, na itinatag ni P. Lesgaft. Ngunit ang Warsaw, kung saan lumipat ang siyentipiko noong 1902, ay naging kanyang masayang lungsod. Sa parehong taon, ipinagtanggol ni Tsvet ang tesis ng kanyang master sa paksang "Physico-chemical structure ng mga butil ng chlorophyll" at natanggap ang posisyon ng associate professor.
Ang kulay ang unang nagpatunay na mayroon lamang dalawang pagbabago (pagbabago) ng chlorophyll: chlorophyll A at chlorophyll B. Nangyari ito noong 1903. Bago ito, naniniwala ang agham na ang bawat halaman ay naglalaman ng sarili nitong uri ng chlorophyll: birch, lichen, violet, atbp. Pinaliit ng kulay ang paghahanap para sa mga chlorophyll sa dalawang anyo. At ginawa niya ito gamit ang isang paraan na siya mismo ang nag-imbento.

Ang pamamaraang ito ay panimula bago, simple at kumplikado sa parehong oras. Ibinuhos ng propesor ang pinong giniling na purified chalk powder sa isang glass tube, binasa ito ng benzene at nagbuhos ng kaunting chlorophyll solution sa ibabaw. Ang tuktok na layer ng chalk ay naging maliwanag na berde. Pagkatapos nito, maingat na sinimulan ng mananaliksik ang pagdaragdag ng solvent, benzene, patak ng patak. Ang berdeng singsing, kasunod ng solvent, ay nagsimulang unti-unting bumaba sa tubo. At pagkatapos (oh, himala!) Napansin ni Mikhail Semenovich na ang malawak na singsing ay nahahati sa ilang makitid. Isang dilaw na guhit ang lumitaw, ito ay gumagalaw nang mas mabagal kaysa sa iba at samakatuwid ay matatagpuan sa itaas ng mga ito. Sa ilalim nito ay sunud-sunod na dilaw-berde at berde-asul na mga guhit, pagkatapos ay dalawa pang dilaw na guhit na may magkakaibang lapad, at higit sa lahat, isang mapusyaw na dilaw. Sa pamamagitan ng maingat na pagsusuri, natukoy ng mananaliksik na sa itaas ng pinakatuktok na guhit ay may isa pang walang kulay.

kanin. 1. Chromatographic separation

nakuha ang mga kulay ng berdeng dahon

sa karanasan ng Kulay.

Kaya, ang isang kumplikadong sangkap ay nahahati sa mga bahagi, tulad ng mga light ray ay nabubulok sa isang spectrum.
Tulad ng nabanggit na, ang isang bagong paraan ng paghihiwalay ng mga kumplikadong sangkap sa mga bahagi ay tinatawag na chromatography. Ang pangalan ay napanatili, bagaman ang kulay ay tumigil sa paglalaro ng anumang papel sa modernong mga pamamaraan ng chromatographic.
Ano ang batayan ng pamamaraang ito? Ang solusyon ng katas mula sa mga dahon ay nakikipag-ugnayan sa chalk powder at nagiging kupas, na nagpapakulay ng chalk (sorbent). Ang lahat ng mga compound na kasama sa pinaghalong ay idineposito sa ibabaw ng mga sorbent particle. Maaari silang bumalik sa solusyon (eluent) at muling i-sorbed sa ibabaw ng chalk powder. Ang mga proseso ng precipitation - dissolution (sorption - desorption) ay nangyayari nang maraming beses sa panahon ng paggalaw ng "singsing" sa haligi.
Sa pagitan ng solusyon (sa benzene, tulad ng, halimbawa, sa Tsvet's) at ang sorbent (chalk), ang balanse ay sa wakas ay naitatag: ang bahagi ng leon ng mga molekula ng natunaw na sangkap ay lumilitaw sa ibabaw ng mga particle, at halos wala sa kanila. manatili sa solusyon.
Ang sikreto ng chromatography ay ipinahayag ng ilang mga molekula na dinadala pababa sa tubo kasama ang daloy ng solvent. Sa daan, dahan-dahan silang namuo muli sa iba pang mga particle ng chalk, at ang mga bagong molekula ay pumapasok sa solusyon sa halip. Ang daloy ng solvent ay patuloy na pumapasok sa tubo mula sa itaas. Sa itaas na bahagi doon ay unti-unting nagiging mas kaunti at mas mababa sorbed sangkap, at sa ibabang bahagi - higit pa at higit pa.
Ang lansihin ay ang mga molekula na may iba't ibang mga istraktura o komposisyon ay iba-iba ang sorbed sa ibabaw ng sorbent. Ang ilan sa kanila ay nakakabit nang mas malakas sa tisa, ang iba ay mas mahina. Ang ilan ay nananatili sa solusyon nang mas matagal at mas mababa sa isang nakatali na estado, habang ang iba ay ginagawa ang kabaligtaran. Ang mga molekulang iyon na nananatili sa solusyon nang mas matagal ay may posibilidad na bumaba sa column nang mas mabilis. Unti-unti, ang may kulay na pinaghalong iba't ibang mga sangkap ay pinaghihiwalay sa mga bahaging bahagi nito. Ang bawat sangkap ay puro sa sarili nitong layer. Kung ang haligi (tube) ay may sapat na haba, kung gayon ang mga bahagi ng pinaghalong ay medyo malayo sa bawat isa. Ang bawat kulay na singsing ay tumutugma sa isang partikular na bahagi. At ang kanilang lokasyon na nauugnay sa bawat isa ay bumubuo ng isang chromatogram, sa pamamagitan ng pag-aaral kung aling mga analytical chemist ang maaaring matukoy ang komposisyon ng sangkap. At ang naturang vertical chromatography ay nakatanggap ng matatag na epithet na "haligi".
Gamit ang chromatography ng haligi, hindi mo lamang matukoy ang husay na komposisyon ng isang halo ng mga sangkap, ngunit paghiwalayin din ito sa mga bahagi, isa-isa na hinuhugasan ang "mga singsing" na may isang solvent sa isang hiwalay na lalagyan. Ang pamamaraan ay angkop din para sa ultrafine na paglilinis ng mga sangkap.
Ang pagkakaroon ng kanyang pagtuklas, si Mikhail Semenovich ay nagpapatuloy, pinalawak ang larangan ng pananaliksik. Sa panahon mula 1908 hanggang 1910, nagturo siya ng botany sa Warsaw Polytechnic Institute at sa parehong oras ay nagpatuloy sa pag-aaral ng berdeng pigment ng mga halaman. Noong 1910, ipinagtanggol ni Tsvet ang kanyang disertasyon para sa degree ng Doctor of Botany. Ang paksa ng pag-aaral ay ang mga sumusunod: "Mga chlorophyll sa mundo ng halaman at hayop." Siyempre, kapag nagsasagawa ng mga eksperimento, ginamit ni Mikhail Semenovich ang kanyang makapangyarihang pamamaraan, ngunit bilang isang tool lamang, isang paraan, at hindi isang pagtatapos. Hindi siya nakatanggap ng pagkilala. At hindi niya alam na hindi bababa sa anim na Nobel Prize laureates ang magkakautang sa kanilang mga natuklasan sa kanyang mapanlikhang imbensyon.
Mula noong 1917, si Propesor Tsvet ay nagtuturo sa Yuryev (ngayon Tartu) University. Ngunit noong 1918, pinilit ng digmaan at paghihirap si Mikhail Semenovich na lumipat sa mas kumikitang mga lugar. Itinuring niya ang lungsod ng Voronezh na ganoon. Ginugol niya ang huling taon ng kanyang buhay bilang isang propesor sa Voronezh University.
Noong Hunyo 26, 1919, namatay ang siyentipiko sa gutom at sakit, dahil maraming mga Ruso ang namatay noong Digmaang Sibil.
Ang pamamaraan ng Mikhail Semenovich Tsvet ay malawakang ginagamit sa maraming larangan ng agham at teknolohiya. Lumitaw ang gas-liquid, papel, ion-exchange chromatography, at thin-layer chromatography.
Gamit ang ion exchange chromatography, maaari mong alisin ang katigasan sa tubig o i-desalinate ito. Tumulong din siya sa paghiwalayin ang pinaghalong isotopes ng mga rare earth elements. Ang radyaktibidad ng bawat patak ng solusyon na dumadaloy mula sa ion exchange column ay tinutukoy nang hiwalay. Ito ay lumabas na mas mataas ang atomic number ng isang elemento sa periodic table, mas mabilis itong umalis sa column sa panahon ng chromatographic separation. Ang paghalili ng mga elemento ay nakakagulat na tumutugma sa kanilang kamag-anak na posisyon sa Periodic Table: americium (95), na sinusundan ng curium (96), berkelium at, sa wakas, californium (98).
Kaya, ang pamamaraan ni Tsvet ay nakibahagi sa mga global atomic na proyekto ng ika-20 siglo.
Noong 1992, isang lapida na may epitaph ang na-install sa katamtamang libingan ng siyentipiko sa Voronezh: "Binigyan siya ng pagkakataong tumuklas ng chromatography, paghihiwalay ng mga molekula, pag-iisa ng mga tao."

CHROMATOGRAPHY

Ang Chromatography ay isang pang-eksperimentong paraan ng paghihiwalay ng mga bahagi ng isang halo sa pagitan ng isang nakatigil (nakatigil) na bahagi at isang bahaging gumagalaw*. Batay sa likas na katangian ng nakatigil na yugto, ang chromatography ay nahahati sa dalawang uri - adsorption at distribution.

Sa adsorption chromatography, ang nakatigil na bahagi ay isang solid. Ang solid substance na ito ay sumisipsip ng isang bahagi ng bawat bahagi mula sa pinaghalong.

Ang adsorption ng isang substance ay nangyayari kapag ito ay nasisipsip ng ibabaw ng ibang substance. Ang adsorption ay hindi dapat malito sa absorption, na nangyayari kapag ang isang substance ay nagkakalat sa volume ng isa pang substance at nasisipsip ng buong volume sa halip na sa ibabaw ng pangalawang substance na iyon (Fig. 6.40).

Sa partition chromatography, ang nakatigil na bahagi ay isang likido. Ang mga bahagi ng halo ay ipinamamahagi sa pagitan ng likidong ito at ng mobile phase.

Prinsipyo ng chromatographic separation namamalagi sa katotohanan na ang mobile phase ay patuloy na gumagalaw sa nakatigil na yugto, at habang ito ay nangyayari, sa ilalim ng impluwensya ng nakatigil na yugto, ang mga bahagi ng halo dito ay naghihiwalay.

Pareho sa mga pangunahing pamamaraan ng chromatography na ito ay kinabibilangan ng dalawang pangunahing yugto: 1) pamamahagi ng mga pinaghalong bahagi sa pagitan ng dalawang yugto; 2) paghihiwalay ng mga bahagi ng pinaghalong sa o sa nakatigil na yugto sa pamamagitan ng tuluy-tuloy na daloy ng mobile phase.

Ang bahaging iyon ng pinaghalong may mas malaking koepisyent ng pamamahagi D ay nananatiling natutunaw sa mobile phase at, samakatuwid, mabilis na gumagalaw sa itaas ng nakatigil na yugto. Ang component na may mas mababang distribution coefficient D ay nananatiling naka-adsorbed sa solid stationary phase o na-absorb sa liquid stationary phase. Habang ang mobile phase ay gumagalaw sa itaas ng stationary phase, ang bahaging ito ay dahan-dahang gumagalaw sa kahabaan ng stationary phase.

Ang Chromatography ay gumaganap ng isang partikular na mahalagang papel sa organic synthesis sa paghihiwalay at paghihiwalay ng mga pinaghalong sangkap. Ginagamit ito sa quantitative at qualitative analysis upang matukoy ang mga pinaghiwalay na bahagi ng isang timpla, gayundin upang matukoy ang dalas ng analyte.

Ang terminong "chromatography" ay hindi nagbubunyag ng kakanyahan ng tinalakay na pamamaraan para sa paghihiwalay ng mga mixture. Ang salitang chromatography sa Greek ay nangangahulugang color painting. Ang katotohanan ay ang unang mga pamamaraan ng chromatographic ay ginamit upang paghiwalayin ang mga pinaghalong may kulay na mga sangkap.

Mayroong limang pangunahing pamamaraan ng pagsusuri ng chromatographic:

1. Adsorption

2. Pamamahagi

3. Pagpapalit ng ion

4. Latak

5. Eksklusibo

ako. Adsorption chromatography ay batay sa pumipili na adsorption ng mga indibidwal na bahagi ng pinag-aralan na timpla ng mga naaangkop na adsorbents. Kapag nagtatrabaho sa pamamaraang ito, ang nasuri na solusyon ay dumaan sa isang haligi na puno ng maliliit na adsorbent na butil. Ang adsorption chromatography ay ginagamit upang paghiwalayin ang mga non-electrolytes, vapors at gas.

II. Paghati ng kromatograpiya ay batay sa paggamit ng pagkakaiba sa mga coefficient ng sorption ng mga indibidwal na bahagi ng pinag-aralan na halo sa pagitan ng dalawang hindi mapaghalo na likido. Ang isa sa mga likido (immobile) ay matatagpuan sa mga pores ng porous substance (carrier), at ang pangalawa (mobile) ay isa pang solvent na hindi nahahalo sa una. Ang solvent na ito ay dumaan sa haligi sa mababang bilis. Ang iba't ibang mga halaga ng mga koepisyent ng pamamahagi ay nagbibigay ng iba't ibang bilis ng paggalaw at paghihiwalay ng mga bahagi ng pinaghalong. Ang distribution coefficient ng isang substance sa pagitan ng dalawang immiscible solvents ay ang ratio ng konsentrasyon ng isang substance sa isang mobile solvent sa konsentrasyon ng parehong substance sa isang nakatigil na solvent: (K = Spodv/Snepodv).

Minsan, sa halip na isang haligi, ang mga piraso o mga sheet ng filter na papel na hindi naglalaman ng mga impurities ng mineral ay ginagamit bilang isang carrier para sa isang nakatigil na solvent. Sa kasong ito, ang isang patak ng solusyon sa pagsubok ay inilapat sa gilid ng isang strip ng papel, na nasuspinde sa isang saradong silid, ibinababa ang gilid nito na may isang patak ng solusyon sa pagsubok na inilapat dito sa isang sisidlan na may isang movable solvent ( propellant), na, gumagalaw kasama ang papel, basa ito. Sa kasong ito, ang bawat sangkap na nakapaloob sa pinag-aralan na timpla ay gumagalaw sa likas na bilis nito sa parehong direksyon tulad ng gumagalaw. Ang ganitong uri ng partition chromatography ay tinatawag na paper chromatography.

Ang isang espesyal na uri ng partition chromatography ay gas-liquid chromatography (GLC). Ang iba't ibang non-volatile na likido na idineposito sa isang inert solid carrier ay ginagamit bilang isang nakatigil na yugto; bilang isang mobile phase - gaseous nitrogen, hydrogen, helium, carbon dioxide, atbp. Ang paghihiwalay ng mga mixture sa pamamagitan ng GLC method ay isinasagawa sa mga column, na mga tubo na may panloob na diameter na 1 - 6 mm at haba ng 1 - 5 m, na puno ng isang inert carrier, halimbawa diatomaceous earth, pinapagbinhi na non-volatile liquid, o steel at glass capillaries na may diameter na 0.2 - 0.3 mm at isang haba na may likidong phase na idineposito sa mga dingding ng mga capillary na ito (capillary gas- likidong kromatograpiya).

Dahil maraming mga organikong compound, tulad ng mga biopolymer, ay mahirap o imposibleng ma-convert sa gas phase, ang high-pressure liquid chromatography (molecular liquid chromatography) ay ginagamit para sa mga naturang substance. Ang mga pinong buhaghag na inert carrier na pinahiran ng isang pelikula ng iba't ibang polimer na hindi matutunaw sa mga organikong solvent ay ginagamit bilang isang nakatigil na yugto. Ang pagpuno ng mga haligi (0.mm diameter) na may nakatigil na yugto ay isinasagawa sa ilalim ng presyon sa atm., dahil sa kung saan ang mataas na pagkakapareho at density ng pagpuno at, dahil dito, ang kahusayan sa paghihiwalay ay nakakamit. Ang elution ng mga pinaghiwalay na sangkap ay isinasagawa sa pamamagitan ng pagpasa sa haligi ng anumang angkop na organikong solvent o isang halo ng mga ito sa ilalim ng presyon ng watts.

III. Ion exchange chromatography ay batay sa paggamit ng mga proseso ng pagpapalitan ng ion na nagaganap sa pagitan ng mga mobile ions ng adsorbent at electrolyte ions kapag nagpapasa ng solusyon ng analyte sa pamamagitan ng isang column na puno ng isang ion exchange substance (ion exchanger). Ang mga palitan ng ion ay hindi matutunaw na mga inorganic at organikong high-molecular compound na naglalaman ng mga aktibong (ionogenic) na grupo. Ang mga mobile ions ng mga pangkat na ito ay may kakayahang makipagpalitan ng mga kasyon o anion ng natunaw na sangkap kapag nakipag-ugnay sa mga solusyon sa electrolyte. Aluminum oxide (para sa chromatography), permutin, sulfonated carbon at iba't ibang mga ion exchange substance - ang mga resin ng ion exchange ay ginagamit bilang mga exchanger ng ion. Ang mga Ion exchanger ay nahahati sa mga cation exchanger na may kakayahang magpalitan ng cation (naglalaman ng mga aktibong grupo: - SO3H, - COOH, - OH); mga anion exchanger na may kakayahang magpapalitan ng anion (mga aktibong grupo: - NH2, =NH); ampholytes ay ion exchange substance na may amphoteric properties.

Fragment ng cationite: Pagpapalitan ng cation: RH + KtAn = RKt + Han

Anion exchanger fragment: Pagpapalitan ng anion: ROH + HAn = RAn + H2O

IV. Sediment chromatography ay batay sa iba't ibang solubility ng precipitates na nabuo ng iba't ibang bahagi ng pinag-aralan na pinaghalong may mga espesyal na reagents na inilapat sa isang highly dispersed substance. Ang mga nasuri na solusyon ay ipinapasa sa isang column na puno ng isang porous substance (carrier). Ang carrier ay pinapagbinhi ng isang precipitating reagent, na bumubuo ng mga precipitates na may iba't ibang mga solubilities sa mga ion ng solusyon. Ang nabuo na precipitates, depende sa solubility, ay matatagpuan sa isang tiyak na pagkakasunud-sunod kasama ang taas ng haligi.

V. Eksklusibo(molecular sieve) chromatography ay batay sa iba't ibang permeability ng mga sangkap na molekula sa nakatigil na yugto (highly porous nonionic gel). Ang size exclusion chromatography ay nahahati sa gel permeation chromatography (GPC), kung saan ang eluent ay isang non-aqueous solvent, at ang gel filtration, kung saan ang eluent ay tubig.

pang-eksperimentong bahagi

(Paper chromatography, column chromatography, thin layer chromatography)

1. Chromatography ng papel

Paghiwalayin ang mga sumusunod na mixtures gamit ang paper chromatography:

A) berdeng marker

B) asul na felt-tip pen.

Layunin ng eksperimento: master ang paraan ng papel chromatography, alamin upang matukoy ang pagkakaiba sa pagitan ng mga purong sangkap at mixtures.

Kagamitan: isang baso ng tubig, isang strip ng filter na papel (10 cm x 2 cm), isang berdeng felt-tip pen. Sa layo na 2 cm mula sa dulo ng strip, gumuhit ng pahalang na linya na may felt-tip pen (parallel sa mas maliit na gilid). Kinakailangang ibaba ang dulong ito sa tubig upang ang iginuhit na linya ay nasa itaas ng ibabaw ng tubig. Napansin namin kung paano nabasa ang strip ng papel, tumataas ang tubig kasama nito, umabot sa iginuhit na linya at dinadala ang pintura kasama nito.

At pagkatapos ay makikita natin kung paano lumalabo ang berdeng linya at nagiging dalawang kulay sa itaas - asul, sa ibaba - berde. Ginawa ng eksperimentong ito na matukoy na ang berdeng pintura ng felt-tip pen ay talagang binubuo ng dalawang kulay.

Naghiwalay din ang kulay asul.

Komento: gumamit ng mga felt-tip pen na may tinta na nalulusaw sa tubig(hindi mga marker para sa pag-sign ng mga disc), huwag gumamit ng toilet paper - ang tubig ay tumaas nang masyadong mabilis at ang larawan ay nagiging malabo. Maaari mong subukan ang isang tuwalya ng papel. Kung walang filter na papel, maaari mong putulin ang mga gilid ng pahayagan (mas maraming oras lamang ang gugugol sa pagmamasid).

2.Paggawa ng isang chromatographic column

Bilang isang chromatographic column gumagamit kami ng mga glass tube na may diameter na 6=8 mm at isang haba na 12-15 cm.

Maglagay ng maliit na cotton swab sa tubo sa isang dulo. Pinupuno namin ang haligi sa kalahati ng isang tuyong sorbent - aluminyo oksido. Pinagsasama namin ang sorbent powder. Inaayos namin ang haligi sa binti ng tripod.

TUNGKOL SA pagpapahirap Paghihiwalay ng pinaghalong cation sa isang chromatographic column

Kumuha kami ng mga solusyon ng iron (III) chloride, copper (II) sulfate, cobalt (II) chloride. Ang mga kulay ng mga solusyon na ito ay: dilaw, asul, rosas. Ibuhos ang 10 patak ng bawat solusyon sa isang baso at ihalo sa isang glass rod. Pipette ang 1 ml ng pinaghalong at dahan-dahan, patak-patak, ibuhos ito sa column ng chromatography. Idagdag lamang ang bawat bahagi ng likido pagkatapos masipsip ang nauna. Pagkaraan ng ilang oras, lumilitaw ang mga kulay na singsing ng mga adsorbed ions sa column. Para sa isang mas malinaw na pamamahagi ng mga singsing na may kulay, magdagdag ng 3-4 na patak ng tubig sa chromatographic column. Batay sa kulay ng mga zone, tinutukoy namin ang lokasyon ng mga cation sa column na may sorbent.

https://pandia.ru/text/78/355/images/image011_20.jpg" align="left" width="227" height="303 src=">

Natanggap chromatogrammu- ito ang pangalan ng resulta ng chromatography na isinagawa - at nagpapahiwatig ng pamamahagi ng mga cation.

Kaya, pinapayagan ka ng chromatography na mabilis na paghiwalayin ang isang halo na binubuo ng mga sangkap na may katulad na mga katangian.

Upang magsagawa ng chromatography, hindi lamang aluminyo oksido, kundi pati na rin ang iba pang mga sangkap, tulad ng magnesium oxide, starch, at calcium carbonate, ay maaaring gamitin bilang sorbents. Ang huli ay ang pangunahing bahagi ng isang shell ng itlog ng manok.

Karanasan Paghihiwalay ng pinaghalong cation sa shell ng itlog ng manok

Kumuha tayo ng kalahating shell ng itlog ng manok, na dati nang naalis sa pelikula. Gamit ang cotton swab na nilublob sa ethyl alcohol, punasan ang panloob na ibabaw nito. Kumuha tayo ng pinaghalong solusyon ng tatlong salts (FeCl3, CuS04, CoC12) na inihanda para sa nakaraang eksperimento. Ilapat ang isang patak ng pinaghalong sa loob ng shell. Kapag ang likido ay nasisipsip, ilapat ang isa pang patak ng halo na ito sa parehong lugar. Matapos masipsip ang likido, magdagdag ng isang patak ng tubig sa gitna ng mantsa. Kinukuhaan namin ng larawan ang nagresultang chromatogram.

Ihambing natin ang lokasyon ng mga may kulay na zone sa shell sa resulta ng nakaraang eksperimento. Ang pagkakapareho sa pagkakasunud-sunod ng pag-aayos ng mga kulay na zone ay kapansin-pansin. Ito ay ipinaliwanag sa pamamagitan ng ang katunayan na ang iba't ibang mga ion ay na-adsorbed nang iba: ang ilan ay mas malakas, ang iba ay mas mahina. Ang bilis ng kanilang paggalaw sa pamamagitan ng sorbent ay nakasalalay dito. Kung ayusin natin ang mga cation na naroroon sa pinaghalong sinusuri sa pagkakasunud-sunod ng pagbaba ng kanilang kapasidad ng adsorption, makukuha natin ang sumusunod na serye:

Fe3+ → Cu2+ → Co2+

https://pandia.ru/text/78/355/images/image013_19.jpg" align="left" width="144" height="162 src=">Sa mga laboratoryo, sa halip na mga kabibi, mga espesyal na plato na gawa sa salamin at aluminyo ay ginagamit o plastik. Ang isang manipis na layer ng sorbent ay unang inilapat sa kanila, kaya naman ang chromatography na ito ay tinatawag na manipis na layer. Ang pamamaraang ito ng chromatography ay iminungkahi ng isang siyentipikong Sobyet noong 1938.

https://pandia.ru/text/78/355/images/image015_17.jpg" align="left hspace=12" width="181" height="175">

https://pandia.ru/text/78/355/images/image017_11.jpg" align="left" width="158" height="158 src=">.jpg" align="left" width="154 " taas="163 src=">

Karanasan "Paghihiwalay ng mga mantsa mula sa panulat sa papel"

Kakailanganin namin ang isang bilog ng filter na papel. Sa gitna ng bilog, gumawa ng isang naka-bold na tuldok gamit ang isang itim na felt-tip pen (maaari mong gamitin ang parehong felt-tip pen tulad ng sa nakaraang eksperimento sa bahay). Gumamit tayo ng isang tasa na may bilog na papel. Gamit ang pipette, maglagay ng mga patak ng tubig sa gitna ng mantsa.

https://pandia.ru/text/78/355/images/image021_8.jpg" align="left" width="226" height="246 src=">Praktikal na gawain" href="/text/category/prakticheskie_raboti //" rel="bookmark">praktikal na gawain Nakilala ko ang iba't ibang paraan ng pagsasagawa ng chromatography

Ang Chromatography ay isang paraan ng paghihiwalay ng mga mixture batay sa iba't ibang bilis ng paggalaw ng mga molecule ng iba't ibang substance sa iba't ibang kapaligiran. Samakatuwid, ang mga molekula ay pinaghihiwalay dito. Para sa sangkatauhan, pinahintulutan kami ng pamamaraang ito na gumawa ng isang husay na paglukso pasulong, lumikha ng mga bagong direksyon sa agham, magsagawa ng bagong pananaliksik, gumawa ng mahahalagang pagtuklas, pag-isahin ang mga taong may kaparehong pag-iisip upang magtrabaho sa bawat problema.

Panitikan

1. , “Chemistry. Panimulang kurso. Ika-7 baitang » Moscow. Bustard.2009;

2... "Chemistry. Workbook ika-7 baitang" Moscow Bustard. 2009.

3. Ang Chromatography ay isang simpleng paraan upang pag-aralan ang mga kumplikadong sangkap (Science and Life. No. 2, 1998)

4. Pag-aaral ng chromatography sa isang elective course ( Chemistry sa paaralan No. 5, 2012)

Suporta sa impormasyon at mga mapagkukunan ng Internet

1.http://adalin. *****/l_01_00/l_01_10d. shtml

2. http://www. *****/art/ch-act/0325.php

3. http://*****/articles/565314/

4. http:///?p=94

5.Larawan mula sa personal na archive

Paraan ng chromatography ng papel ay tumutukoy sa plane chromatography, ito ay batay sa pamamahagi ng mga analyte sa pagitan ng dalawang hindi mapaghalo na likido.

Sa partition chromatography, ang paghihiwalay ng mga substance ay nangyayari dahil sa mga pagkakaiba sa distribution coefficients ng mga bahagi sa pagitan ng dalawang hindi mapaghalo na likido. Ang sangkap ay naroroon sa parehong mga yugto bilang isang solusyon. Ang nakatigil na yugto ay pinananatili sa mga pores ng chromatographic na papel nang hindi nakikipag-ugnayan dito; ang papel ay nagsisilbing isang carrier ng nakatigil na yugto.

Mga uri ng chromatography paper:

1) ang hydrophilic na papel ay nagpapanatili ng hanggang 22% na tubig sa mga pores nito; nakatigil na yugto - tubig, mobile phase - organikong solvent; Ang ganitong papel ay ginagamit upang matukoy ang mga sangkap na nalulusaw sa tubig.

2) hydrophobic paper repels tubig, kaya ito ay pinapagbinhi ng isang non-polar organic solvent (stationary phase); mobile phase - tubig; Ang papel na ito ay ginagamit upang matukoy ang mga compound na hindi matutunaw sa tubig (mga acid na natutunaw sa taba, bitamina).

Nalalapat ang mga sumusunod na kinakailangan sa chromatographic paper:

¨ kemikal na kadalisayan;

¨ neutralidad ng kemikal at adsorption na may kaugnayan sa nasuri na mga sangkap at sa mobile phase;

¨ pagkakapareho sa density;

¨ magkaparehong hibla na oryentasyon.

Upang makakuha ng chromatogram, isang patak ng pinaghalong sinusuri ay inilalagay sa papel. Ang papel ay inilalagay sa chromatographic chamber, ang dulo nito ay nahuhulog sa isang sisidlan na may eluent. Ang solvent ay gumagalaw sa kahabaan ng papel, ang pinaghalong analytes ay ipinamamahagi sa pagitan ng mga mobile at nakatigil na mga phase at pinaghihiwalay sa papel sa anyo ng mga spot o guhitan. Ang posisyon ng mga bahaging zone ay natutukoy sa pamamagitan ng pagbuo ng chromatographic na papel na may naaangkop na mga reagents, na bumubuo ng mga kulay na compound na may mga bahagi ng pinaghalong pinaghihiwalay.

Upang mabilang ang kakayahang paghiwalayin ang mga sangkap sa isang chromatographic system, ginagamit ang koepisyent ng pamamahagi K p - ang ratio ng konsentrasyon ng isang sangkap sa mga nakatigil at mobile na yugto. Ang pang-eksperimentong pagpapasiya ng mga koepisyent ng pamamahagi sa pamamaraang ito ay imposible; upang masuri ang kakayahang paghiwalayin ang mga sangkap sa papel, ginagamit ang displacement (mobility) coefficient R f. Ang displacement coefficient ay katumbas ng ratio ng bilis ng paggalaw ng substance () sa bilis ng paggalaw ng mobile phase (). Sa pang-eksperimentong paraan, ang halaga ng R f ay matatagpuan bilang ratio ng distansya ng X na nilakbay ng substance sa layo na X f na nilakbay ng solvent mula sa simula hanggang sa front line:

.

Ang koepisyent Rf ay nag-iiba sa loob ng saklaw na 0 – 1.00. Ang halaga ng Rf ay depende sa likas na katangian ng sangkap na tinutukoy, ang uri ng chromatographic na papel, ang kalidad at likas na katangian ng solvent, ang paraan ng paglalapat ng sample, ang eksperimentong pamamaraan at temperatura. Ang Rf coefficient ay hindi nakasalalay sa konsentrasyon ng analyte at ang pagkakaroon ng iba pang mga bahagi.

Pagkakakilanlan Ang chromatogram ay isinasagawa sa mga sumusunod na paraan:

¨ visual na paghahambing ng katangian ng kulay ng mga zone ng mga sangkap sa pinag-aralan at karaniwang chromatograms;

¨ pagsukat ng mobility coefficients Rf para sa standard at analyte sa isang partikular na solvent. Ang Chromatography at pagpapasiya ng R f para sa pagsubok at karaniwang mga mixtures ay isinasagawa sa parehong papel at sa parehong silid sa ilalim ng mahigpit na magkaparehong mga kondisyon. Sa pamamagitan ng paghahambing ng mga coefficient Rf, ang isang konklusyon ay ginawa tungkol sa pagkakaroon ng ilang mga bahagi sa pinag-aralan na pinaghalong.

dami direktang gumanap mula sa chromatogram o sa pamamagitan ng paghuhugas (pag-eluting) ng analyte mula sa papel.

Mga pamamaraan ng pagsusuri sa dami:

¨ visual na paghahambing ng intensity ng kulay ng mga spot sa pagsubok at karaniwang chromatograms (semi-quantitative determination, accuracy 15–20%);

¨ pagsukat sa lugar ng lugar na nabuo ng isang naibigay na bahagi at paghahanap ng konsentrasyon ng sangkap gamit ang isang graph ng pagkakalibrate na binuo para sa isang serye ng mga karaniwang solusyon sa mga coordinate: lugar ng lugar - konsentrasyon ng sangkap; katumpakan ng pagpapasiya 5 - 10%;

¨ elution ng analyte mula sa ibabaw ng chromatogram at spectrophotometric o fluorimetric na pagsukat ng optical density ng eluate (A); ang konsentrasyon ng isang sangkap sa solusyon ay kinakalkula gamit ang formula:

kung saan ang K ay ang koepisyent ng proporsyonalidad; S - lugar ng lugar, sinusukat dati, mm 2; katumpakan ng pagpapasiya 1%.

Ayon sa paraan ng chromatography, mayroong pataas (Fig. 21), pababang (Fig. 22), circular (Fig. 23), gradient at two-dimensional chromatography.

Ang paraan ng chromatography ng papel ay malawakang ginagamit para sa pagtukoy ng mga inorganikong compound, amino acid, amine, protina, carbohydrates, fatty acid, phenol, bitamina sa kemikal, pagkain, industriya ng parmasyutiko, gamot, at biochemistry.

Ang pamamaraan ay natagpuan ang aplikasyon sa pagtatasa ng halos lahat ng mga produktong pagkain: sa produksyon ng asukal - para sa pagpapasiya ng carbohydrates; sa baking at confectionery - amino acids, organic acids, carbohydrates, polysaccharides at carbonyl compounds; sa winemaking - mga organikong acid at amino acid; sa paggawa ng gatas at mga produkto ng pagawaan ng gatas - mga amino acid; sa industriya ng pagpoproseso ng karne - phenols, fatty at volatile acid, amino acids at carbonyl compounds.